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TNF 对嗜酸性粒细胞L |
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素直接标记的抗人CD15-FITC，CD49d-PE，CD62L-PE及Isotype单抗购自美国PharMingen公司；TNF α购自Peninsula Lab公司。
1.2 实验分组与处理 取健康人外周肝素抗凝血，按以下分组进行处理：对照组（Control group）；TNFα 1组：TNF α终浓度为100u／ml；TNFα 2组：TNF α终浓度为1 000u／ml。100μ1外周抗凝全血经TNFα 37°C 30min温育后，分别加入CD15-FITC／CD 62L-PE和CD15-FITC／CD49d-PE单抗10μl，室温孵育30min，用红细胞裂解液（0．155mmol／L NH4Cl，0．01mol／L KHCO3，0．1mmol／L EDTA，pH7．4）裂解红细胞，至透明时离心获取有核细胞，用PBS（pH7．4）洗2次，1％多聚甲醛固定，3d内上机测定。在前散射和侧散射的二维Dot-plot图中，划出粒细胞区，然后对粒细胞的荧光强度作Dot-plot图，以阳性细胞百分率表示实验结果［5］。
1.3 统计学处理 用GB-stat统计学软件对实验结果进行统计学处理，两样本均数的显著性比较用Student’s t检验。
2 结果
2.1 TNF α对人外周血粒细胞群体中CD15＋和CD15－细胞CD49d表达的影响 在表1中，CD15＋细胞CD49d的最大表达率为5．30％，最低表达率为0．85％；而CD15－细胞的CD49d的最大表达率为92．5％，最低表达率为78．60％。各组间均数比较无统计学意义。
表1 TNFα对粒细胞群体中CD15＋和CD15－细胞CD49d表达的影响
Tab 1 The effect of TNFα on CD49d expression in CD15＋ and CD15－ granulocytes（±s）
Group n CD15－（％） CD15＋（％）
Control 7 88．05±5．24 1．32±1．89
TNFα（100u／ml） 8 87．25±5．41 1．00±2．03
TNFα（1 000u／ml） 6 85．30±4．32 2．31±2．15
2.2 TNFα对人外周血粒细胞群体中CD15＋和CD15－细胞CD62L表达的影响 表2结果显示，TNFα可增强CD15＋和CD15－细胞CD62L的表达，TNFα不同剂量组间均数比较无统计学差别。
表2 TNFα对粒细胞群体中CD15＋和CD15－细胞CD62L表达的影响
Tab 2 The effect of TNFα on CD62L expression in CD15＋ and CD15－ granulocytes（±s）
Group n CD15－（％） CD15＋（％）
Control 7 68．80±4．34 41．13±2．78
TNFα（100u／ml） 4 77．50±3．17** 48.98±8.35*
TNFα（1 000u／ml） 6 76．70±3．84** 50．99±8．21**
*P＜0．05， ***P＜0．01，compared with control group
3 讨论
3.1 粒细胞群体中CD15－细胞是否为嗜酸性粒细胞 据文献报道，正常人外周血嗜中性粒细胞在静态下不表达VLA-4，在活化状态下也只有极少量表达，而嗜酸性粒细胞大量表达［6，7］，因此有人建议VLA-4可作为嗜酸性粒细胞的特异标志。CD15主要表达在嗜中性粒细胞，在嗜酸性粒细胞中也有少量表达。从我们的结果中发现： CD15＋细胞中VLA-4表达率小于5．30％，说明CD15＋细胞主要为嗜中性粒细胞；而在CD15－细胞中，VLA-4表达率大于78．30％，说明在CD15－群体中主要为嗜酸性粒细胞上一页 [1] [2] [3] 下一页
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