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烟溶液与温石棉对细胞增殖活性的影响 |
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法测定表明多环芳烃含量低于0.5 μg，烟溶液的pH值为7.2。将此烟溶液稀释不同倍数后染毒。
3．石棉的处理：采用国产茫崖温石棉，用PBS配成不同浓度的混悬液，经超声分散和充分振荡混匀后备用。石棉纤维分散度为：<5 μm占9%；5～10 μm占46%；10～20 μm占34%；>20 μm占11%，直径<0.2 μm占95%。
4．细胞染毒：将HEL细胞接种于24孔培养板中，每孔5×104个细胞，在37℃、5% CO2条件下培养24小时，然后分别加入2.5、5.0、10.0、20.0、40.0和80.0 μg/ml的温石棉和0.312 5、0.625、1.25、2.5、5.0×10-4支/ml的烟溶液以及2.5 μg/ml温石棉+0.312 5×10-4支/ml烟溶液，2.5 μg/ml温石棉＋0.625×10-4支/ml烟溶液，5.0 μg/ml温石棉＋0.312 5×10-4支/ml烟溶液，在37℃、5% CO2条件下继续培养6小时。
5.［3H］-TdR参入法测定DNA合成：染毒6小时后，每孔加入终浓度为37 kBq/ml的［3H］-TdR，继续培养3小时，然后用PBS洗3次，用0.125%胰蛋白酶消化细胞，再加入1.5ml 10%的三氯乙酸，用细胞收集器将细胞收集到玻璃纤维滤纸上，于80℃烤干，放入液闪瓶中，加入5 ml闪烁液，用Beckman LS6500型液闪仪测定放射活度，用每分钟液闪次数（1/min）表示。
6．统计分析方法：用SPSS/PC+软件对单独作用进行t检验，对联合作用进行多因素方差分析(ANOVA)。
结果
1.烟溶液单独作用对HEL细胞DNA合成的影响(表1)：当烟溶液浓度较低时，可促进DNA的合成，其中0.625×10-4支/ml、1.25×10-4支/ml烟溶液引起HEL细胞DNA的合成明显高于对照组，但当烟溶液浓度较高时，则可抑制DNA的合成，其中5.0×10-4支/ml烟溶液可明显抑制DNA的合成。
表1 烟溶液单独作用对人胚肺细胞DNA合成的影响(±s)
烟溶液
(×10-4支/ml) 液闪次数(1/min) t值 P值
0
1 061±134
0.312 5 1 193±108 1.328 0.255
0.625 1 432±132* 3.416 0.027
1.25 1 567±158* 4.230 0.013
2.50 903±128 1.477 0.214
5.0 796± 56* 3.160 0.034
与对照组比较*P<0.05
2.温石棉单独作用对HEL细胞DNA合成的影响(表2)：当温石棉剂量低于20 μg/ml时，随石棉剂量增大，DNA合成也增多，当石棉剂量超过40 μg/ml时，则随剂量增加，其促DNA合成能力下降。
表2 温石棉单独作用对人胚肺细胞DNA合成的影响(±s，n=3)
石棉(μg/ml) 液闪次数(1/min) t值 P值
0
1 061±134
2.5 1 127±115 0.647 0.553
5.0 1 404±152* 2.932 0.043
10.0 1 468±250 2.485 0.068
20.0 1 701±140* 5.720 0.005
40.0 1 614±255* 3.325 0.029
80.0 1 246±211 1.282 0.269
与对照组比较*P<0.05
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