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人乳头瘤病毒16型 湖北株 E7基因逆转录病毒重组体的构建及在真核细胞中表达 |
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盛德乔 伍欣星 王宇哲 赵 丁晓华 赵文先
近年来的研究进一步证实HPV16 E7基因是其最主要的恶性转化因子。我们将HPV16 E7基因克隆到逆转录病毒载体pLXSN上，并对其在真核细胞中的表达进行了研究。
HPV16(湖北株)E7基因是从本地区一宫颈癌组织中分离得到，将其定向克隆到逆转录病毒载体上，筛选后获得的重组体经双酶切(EcoRⅠ/BamHⅠ)可获得约300bp的E7基因片段和5.8kb空载体片段，重组体命名为pL(E7-HB)SN。将大量提取并纯化后的重组质粒用磷酸钙沉淀法导入生长在含10%小牛血清的DMEM培养液中的NIH/3T3细胞，收获重组体转染后不同时间的细胞，用RT-PCR和间接免疫荧光试验检测E7基因在3T3细胞中的表达。将不同转染时间收获的细胞作细胞涂片，剩下的细胞提取细胞总RNA后进行RT-PCR，结果发现重组体转染后48小时细胞中即有E7基因mRNA转录。细胞涂片经过E7蛋白单抗和羊抗鼠IgG-FITC(异硫氰酸荧光素)染色，转染后48小时的涂片在荧光显微镜下可看到特异性的颗粒状黄绿色荧光，72～96小时荧光反应最强，120小时后部分细胞出现裂解。这表明HPV16(湖北株)E7基因逆转录病毒重组体构建正确，并能在真核细胞中瞬时表达。
本课题受湖北省“八五”科技攻关课题基金资助
作者单位：盛德乔（443003 宜昌，湖北三峡学院医学院生化教研室）
伍欣星 王宇哲 赵 丁晓华 赵文先（湖北医科大学病毒学研究所分子生物学室）
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