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短小芽胞杆菌E601抗电离辐射性的研究 |
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cial use.
【Key words】 Ionizing radiation sterilization Radiation resistance indicator bacterium B.pumilus E601 D10 value
短小芽胞杆菌E601已在中国确定为辐射灭菌指示菌，为使该菌在灭菌过程中的应用标准化、规范化，保证灭菌质量，作者对其固有抗辐射性和影响因素及如何制备抗辐射稳定的生物指示剂进行了研究，结果如下。
材料和方法
一、指示菌的制备：短小芽胞杆菌E601由中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所提供。按《消毒技术规范》(卫生部1991)的方法制备芽胞悬液。分别用磷酸盐缓冲液、2%基质液、2%牛血清稀释芽胞悬液，使芽胞浓度达1.0×107cfu/ml，备辐照应用。
用磷酸盐缓冲液将芽胞悬液稀释至5×108cfu/ml，取20μl滴染脱脂布片、滤纸片、塑料膜，37℃培养箱干燥40～50min，即制成指示菌片。
2%基质液稀释芽胞悬液，使浓度达5×108cfu/ml，取20μl滴于脱脂塑料膜，超净台下吹干则成可溶性菌片。
二、射线辐射：辐照源由北京师范大学低能核物理研究所提供。钴-60源，总装源能量为2.22×104贝克，辐照剂量率为5.28kGy/h。BF-5电子直线加速器E＝5Mev，I＝100μA，扫描宽度为60cm，剂量率为1.2kGy/min。芽胞悬液装于5ml玻璃管中，干燥菌片直接放于剂量均匀区进行辐射。
三、存活菌数的测定和D10值的计算：芽胞悬液或指示菌片洗脱液振打混匀后做10倍递减稀释到适宜浓度，按《消毒技术规范》(卫生部1991)涂抹法进行菌落计数［1］。
本研究选用D10值作为评价细菌芽胞抗辐射性的指标。D10值是指细菌芽胞受电离辐射，杀灭一个对数级(90%)微生物所需照射剂量。试验中，电子束和γ射线的辐照剂量设置为：
电子束 0 1.4 3.3 5.4 7.8 10.1kGy
γ射线 0 1.3 2.7 4.5 7.0 9.5kGy
指示菌被辐射时，按此剂量设置分为6组，以辐照剂量为自变量，残存菌数为应变量，求出样品剂量存活曲线y=a+bx，即得D10值，D10=1/b。
结 果
一、短小芽胞杆菌E601对辐照的反应性：用γ射线对含不同介质的芽胞悬液以及各种指示菌片进行照射。结果表明，随着辐照剂量增大，残存菌数逐渐减少。将芽胞存活菌数的对数与相应辐照剂量作图，两者成直线负相关，相关系数r均大于0.99(表1)。
表1 γ射线对悬液中芽胞的杀灭作用
芽胞悬液 回归方程 相关系数 D10值(kGy)
蒸馏水悬液 y=7.16-0.590x 0.9974 1.76
2%基质液 y=7.24-0.524x 0.9918 2.10
2%牛血清 y=7.19-0.478x 0.9940 2.07
二、共存介质及载体对芽胞抗性的影响：芽胞悬液中的介质不同时，D10值不同(表1)。蒸馏水悬液D10值为1.76kGy与2%基质液2.10相比二者差异有显著性(t＝10.9，P＜0.01)。2%小牛血清液中芽胞D10值也明显高于蒸馏水悬液中芽胞D10值。此结果表明，有机介质对悬液中的短小芽胞杆菌E601具有保护作用。
四种指示菌片的辐射抗性各不相同(表2)，以塑料作载体，芽胞的D10值明显高于滤纸片和布片作载体时的D10值(t＝9.36，P＜0.01)，表明细菌芽胞所依附的载体对其辐射抗性有影响作用。
表2 γ射线对干燥于菌片上的芽胞的灭活作用
指示菌片 回归方程 相关系数 D10值(kGy)
布指示菌片 y=6.31-0.620x 0.9929 1.60
滤纸指示菌片 y=7.01-0.624x 0.9916 1.61
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