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维生素A对胸腺细胞凋亡的影响 |
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徐世侠 叶广俊 薛彬 王玉晶
胸腺细胞在缺少营养因子时可发生凋亡，维生素A作为一种营养素可促进机体的免疫功能，本研究观察了维生素A对胸腺细胞凋亡的影响。
一、材料与方法
1.4～6周Wistar大鼠，常规制备胸腺细胞单细胞悬液。
2.胸腺细胞凋亡的诱导：胸腺细胞加入24孔培养板中，每孔5×106/ml，用不含小牛血清的RPMI-1640培养基进行培养，同时加入不同浓度的维生素A培养24小时。
3.细胞沉淀固定包埋后制备超薄切片，然后进行电镜观察。
4.DNA片断的提取及琼脂糖电泳：将细胞悬液(2×106/ml)加入细胞裂解液，蛋白酶K消化，酚∶氯仿∶异戊醇抽提后，加入3 mol/L NaAc及无水乙醇，1.8%琼脂糖电泳2.5小时观察结果。
5.流式细胞仪分析：细胞沉淀加入1 ml PI染液，过夜后FACS仪于波长630 nm处用lysⅡ软件检测。
二、结果
1.电镜可见凋亡的胸腺细胞，表现为核固缩及新月形改变。
2.DNA琼脂糖电泳：胸腺细胞在无血清的培养基中培养24小时后，细胞DNA电泳出现典型的梯状带，培养的同时加入不同浓度的维生素A可明显抑制胸腺细胞的凋亡，以10-8～10-6 mol/L更为明显。
3.流式细胞仪分析：胸腺细胞在不含小牛血清的培养基中培养24小时后，凋亡的百分率为53.7%，加入10-9～10-6 mol/L的维生素A对凋亡的百分率降至27.3%～18.4%。
三、讨论
本实验从电镜、DNA电泳及流式细胞仪三方面证实了去除营养因子后胸腺细胞可发生凋亡，加入10-8～10-6 mol/L的维生素A能明显抑制这种凋亡，且具有剂量-效应关系，动物实验表明维生素A缺乏时胸腺重量减轻，补充维生素A可增加胸腺的重量，可能与维生素A促进增殖分化及抑制凋亡有关。其机制可能为维生素A通过其代谢产物与特异性的维甲酸受体结合影响到与凋亡有关的基因如bcl-2，fas等表达而发挥其作用，详细机制有待于进一步研究。
作者单位：100037 北京海军总医院儿科(徐世侠、王玉晶)；北京医科大学公共卫生学院(叶广俊、薛彬)改变。
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