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RNA DNA嵌合分子介导的高效基因修复 |
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汤富酬 韩嵘 薛友纺
摘 要：本文介绍了RNA/DNA嵌合分子介导的高效基因修复技术。这一技术是1996年开始发展起来的全新技术，它通过人工合成的双链开环RNA/DNA嵌合分子转染细胞而使特定基因靶位点产生单碱基改变，从而修复突变基因。这一技术高效（目前最高可达50％以上）、特异性强、安全、无随机插入致变的危险、无免疫反应、无明显毒性，能够用于定点突变、基因敲除、动植物功能基因组学、药物遗传学等很多方面的研究，在不久的将来能够应用于人类基因治疗，具有很高的应用价值和医学前景。
关键词：RNA/DNA嵌合分子；基因治疗；基因修复
中图分类号：Q52 文献标识码：A 文章编号：0253－9772(2000)04－0265－04
Targeted Gene Correction Directed by Chimeric
RNA/DNA Oligonucleotides
TANG Fu-chou HAN Rong XUE You-fang
（College of Life Sciences,Peking University,Beijing 100871，China）
Abstract：We introduce a new techniquetargeted gene correction directed by chimeric RNA/DNA oligonucleotides which began at 1996.It uses synthetic doublestranded noncircular RNA/DNA chimeric oligonucleotides to transfect cells and make a singlebased change at the targeted site of the target gene.It is highly efficient (the highest efficiency is more than 50％),highly special,safe,without danger of mutation caused by random insertion,without immune response,and without obvious toxicity.It can be used to make point mutation,or gene knockout plants and animals,and is very likely to be used in human gene therapy in the near future.It is also valuable in the study of functional genomics,pharmacogenetics,and medicine.
Key words:RNA/DNA chimeric oligonucleotides;gene therapy;gene correction
在过去的20年中科学家们一直在试图用DNA或RNA疗法治疗遗传疾病、癌症和传染病。科学家们的努力虽然已经取得了很大进展，但是在实际应用中仍然困难重重，临床治疗的成功率很低［16,22］。
一般的基因治疗大部分采用的是基因转入(gene addition)的方法，即向细胞内转入原有缺陷基因的功能正常的拷贝。但是这种方法有很多缺陷［22］：(1)基因常常很大，含有很多外显子和复杂的调控序列，调控序列甚至可能距离表达序列数百个kb［17］，常常使构建转运载体很困难，有时甚至不可能；(2)转运载体通常是病毒载体，虽然转染效率高，但是会产生免疫反应，特别是多次使用时会明显减弱转入基因的表达效率；(3)一般的基因治疗采用的都是将正确拷贝的基因随机整合入基因组中。随机插入的正确拷贝的基因要得到合适的表达和平衡是很困难的，因为许多基因的表达是受到严密控制的，并且严格依赖于基因上下游的DNA序列（context dependent），而且随机整合有插入致变的危险。采用同源重组（homologous recombination）的办法将正确拷贝的基因打靶到对应的缺陷基因位置上，虽然能够克服随机整合带来的问题［22］，但是这种方法效率非常低，远远达不到基因治疗的临床要求。
近年来发展起来的RNA/DNA嵌合分子介导的基因修复（targeted gene correct[1] [2] 下一页
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