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孕早期人母 |
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% Percoll 非连 续密度梯度离心，收集界面细 胞(滋养细胞：35%～55%；蜕膜淋巴细胞：45%～60%)，离心洗涤配成1×106浓度［1 ，2］。
1.2.2 外周血淋巴细胞的分离 用肝素抗凝的人外周血8～10 ml， 以Hank ’s液2∶1稀释，加至淋巴细胞分离液上，200 r/min离心20 min。收集界面细胞，洗涤离心 配成1×106浓度。
1.2.3 NK细胞杀伤活性测定 采用LDH释放试验测定杀伤效果［3］ 。以K562细胞(上海细胞生物所提供)为靶细胞，按效靶比例10∶1加入蜕膜或外周血 淋巴细胞，在96孔培养板上按常规进行，每组均做3复孔。培养22 h后加LDH基质液，显色， 测定光吸收值(A)。
1.2.4 CD56+、CD3+细胞百分含量测定 将蜕膜或外周血淋巴细胞先与 NK、CD3FITC和抗小鼠IgG的FITC 37℃孵育30 min，洗涤后，用美国BECTON DICKINSON流 式细胞仪分析，每个样品含4 000个细胞［4］。
1.2.5 类似混合淋巴细胞反应试验(MLR) 滋养细胞作为刺激细胞，蜕膜淋 巴细胞、母方外周血淋巴细胞为反应细胞，调节细胞浓度1×106，各取0.1 ml加入96孔培 养板，每组3复孔(刺激细胞先经50 μg/ml丝裂霉素37℃处理30 min)，5% 37℃温箱孵 育5 d，培养结束前18 h加3H-TdR 0.6 mu/孔。收集细胞于净化滤纸片，加闪烁液，置β射 线计数仪测定CPM值［5］。
1.3 统计学处理 测定数据采用均数±标准差(±s)，组间比较采用t检验及配对t检测。
2 结果
2.1 流式细胞仪分析蜕膜及外周血淋巴细胞亚群 孕早期蜕膜组织中NK样 细胞比例高于其外周血及对照组外周血比例(P＜0.05)。早孕妇女与非孕妇女外周血比较无显著性差异(见表1)。
表1 FACS分析淋巴细胞亚群(±s ，%)
Tab.1 FACE analysis of lymphocyte subsets(±s，%)
Group Case CD56＋ CD3+
decidual lymphocyte 3 46.08±9.891) 41.61±2.272)
PBL of pregnant woman 3 16.71±2.19 69.82±13.50
PBL of unpregnant woman 4 14.88±9.11 67.89±5.82
Note:1),2)compared with the other two groups， P＜0.05
2.2 NK细胞杀伤活性的测定 孕早期蜕膜组织NK细胞杀伤活性明显低于 其外周血及对照组外周血NK细胞杀伤活性(P＜0.05)，孕妇外周血与非孕 妇女外周血无显著性差异(见表2)。
表2 蜕膜淋巴细胞杀伤活性(±s ，%)
Tab.2 NK cytotoxity of decidual lymphocyte(±s，%)
Group Case cytotoxity
decidual 5 5.14±2.421)
PBL of pregnant woman 5 123.64±7.11
PBL of unpregnant woman 5 20.34±5.65
Note:1)compared with the other two groups,P＜0.05
2.3 蜕膜淋巴细胞反应性 滋养细胞及母方外周血淋巴细胞不能刺激蜕膜 淋 巴细胞产生增殖反应(P＞0.05)，父方外周血淋巴细胞能有效刺激蜕膜淋 巴细胞及母方外周血淋巴细胞的增殖(P＜0.01)；但对后者的刺激强 度明显高于前者(见表3)。
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