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咖啡酸 阿魏酸和CA |
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广泛，希望从中得到治疗与ET相关性疾病的新方法。本研究采用桂皮酸类化合物咖啡酸(caffeic acid, CFA)、阿魏酸(ferulic acid, FLA)及本实验室从中草药中提取的单体化合物CA-1201对内皮素-1(endothelin-1,ET-1)生物效应的拮抗作用进行了探索。
材料与方法
1.材料：ET-1、CFA、FLA购自美国Sigma公司；CA-1201为本实验室自中草药红背丝绸［Cissus assamica(Laws.) Craib］中分离、提取、鉴定的单体化合物，化学纯度为99.5%以上；昆明种小鼠、SD大鼠均购自北京医科大学实验动物部；RBP-1型动物血压计为中日友好医院产品；MB-Ⅲ型酶标检测仪为北京市新技术应用研究所产品。
2.CFA、FLA、CA-1201对ET-1致小鼠急性死亡的保护实验：昆明种小鼠，雌雄兼用，体重(20±2) g，随机分组，禁食不禁水18 h后，腹腔注射不同剂量的CFA、FLA和CA-1201 30 min后，自尾静脉注射ET-1 12 nmol/kg；对照组自腹腔注射生理盐水后30 min再自尾静脉注射与药物处置组相同剂量的ET-1，观察给ET-1后15 min内小鼠的存活情况，存活时间超过15 min按15 min计，记录动物死亡时间，并与对照组比较。
3.CFA、FLA和CA-1201对ET-1缩血管效应的拮抗作用：雄性SD大鼠，体重(230±10) g，将大鼠击昏后快速摘取胸主动脉，经分离结缔组织后，剪成2～3 mm宽的血管环，分别置于Krebs-Henseleit生理溶液［K-H液，pH(7.40±0.05)，95%O2+5%CO2，(37.0±0.5)℃］中，加2 g基础张力、用10-7mol/L去甲肾上腺素预激2次、平衡、稳定后，加入ET-1 10-9 mol/L，待达到最大收缩效应后，分别加入不同浓度的CFA、FLA和CA-1201(用2%DMSO为溶媒，实验用2%DMSO作对照)，经张力换能器连台式平衡记录仪(上海大华仪表厂)，记录血管等张收缩与舒张情况。
4.CFA、 FLA和CA-1201对ET-1升血压效应的拮抗作用：雄性SD大鼠，体重(230±10) g，禁食不禁水18 h后，CFA、 FLA和CA-1201不同剂量尾静脉注射后，按6 μg/kg量自尾静脉注射ET-1，用阻抗法测定大鼠尾动脉血压变化；对照组以等量生理盐水处理后尾静脉注射与药物处置组相同剂量的ET-1；并将收缩压变化值与对照组比较。
5.CFA、FLA和CA-1201对ET-1致血管平滑肌细胞增殖效应的拮抗作用：取第5代兔主动脉平滑肌细胞(RAVSMC)以传代培养法调整细胞数为1×105.mL-1，接种于96孔培养板(100 μL/孔)，37℃、 5%CO2孵育24 h，吸去培养液，换以1%小牛血清的DMEM培养液，加入ET-1(10 nmol.L-1)后继续孵育不同时间后，细胞以结晶紫染色后用酶标检测仪在570 nm处测定光密度值，得到ET-1与RAVSMC的时间-效应曲线；加入CFA、 FLA、 CA-1201后考察其对ET-1致平滑肌细胞的增殖作用，染色后测定各孔光密度(OD)值。
结 果
1.CFA、 FLA和CA-1201对ET-1致小鼠急性死亡的保护实验：由表1可见，CFA、 FLA和CA-1201均能有效地拮抗ET-1致小鼠急性死亡作用，该作用具剂量依赖性；药物浓度相同时，FLA的拮抗效能大于CFA和CA-1201。
表1 CFA、 FLA和CA-1201对ET-1致小鼠急性死亡时间的拮抗作用
Tab 1 Effects of CFA, FLA and CA-1201 on mouse acute death time induced by ET-1 (min,±s，n＝10)
Treatment Death time
Dose(mg/kg) 0 0.1 1.0 10 100
CFA 2.24±1.02 2.33±0.19 2.58±0.21 3.19±0.88 12.72±3.11**
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