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不同功能状态精子表面复型的透射电镜观察 |
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江一平 吴翊钦 钟秀容 林芸秀 魏玉珍
【摘要】 目的 建立实用的实验程序，观察不同功能状态下的精子表面超微结构特点。 方法 用BWW上游法分离活动的人精子：BWW体外获能、诱导顶体反应和低渗膨胀试验处理后，将精子贴附于阳离子膜玻片上，叔丁醇冷却干燥后真空铂－碳喷镀复型。复型膜经3%氢氟酸剥脱，次氯酸钠腐蚀，透射电镜观察。 结果 人精子表面复型图像清晰，立体感强，细节较丰富、清晰，获能精子顶体区呈网络状，顶体反应时可见顶体区大量互相吻合的小泡，经低渗处理的精子顶体区出现类似获能和顶体反应的现象。 结论 表面复型－透射电镜技术可用于观察精子的不同生理状态引起的表面形貌变化，方法简便，可重复性好，具有良好的应用价值。
【关键词】 表面复型 电子显微镜 获能 顶体反应 精子
THE FUNCTIONAL ULTRASTRUCTURE OF SPERMATOZOA
VIEWING BY SURFACE-REPLICA TRANSMISSION
ELECTRON MICROSCOPY
Jiang YipingΔ, Wu Yiqin, Zhong Xiurong， Lin Yunxiu, Wei Yuzhen
(Department Histology and Embryology, Lab ratory Electron Microscopy,Fujian Medical University,Fuzhou)
【Abstract】 Objective To assess the variability of the surface-replica method for the observation of functional ultrastructure of human sperm.Methods Motile human spermatozoa,separated by swimming up in BWW,before-after capacitation,induced acrosome reaction and pretreated with hypoosmotic medium (HOS test),were fixed,layered on the poly-L-lysine coated slide-cover glass and dehydrated by tert-butanol method.The sperms on cover glass were coated by Pt/C shadowing in high vacuum to form surface-replica film.The film was stripped from glass by 3% hydrofluoric acid and digested with NaClO and then,after drying,was observed under transmission electron microscope.Results The images of surface-replica of human sperm were clear and stereo to show the surface geomorphology of spermatozoa in different physiological state.Conclusion The method of surface-replica can be used to analyze the functional altervation of sperm in ultrastructural level.
【Key words】 Surface-replica; Electron microscopy; Capacitation; Acrosome reaction; Spermatazoon
精子在成熟和受精过程中生理状态发生很大变化，许多变化往往可表现在细胞表面超微结构上，超薄切片透射电镜难于观察细胞全表面，故通常采用扫描电子显微镜技术(SEM)。由于一般SEM分辨率较低，观察精确度受到较大限制，而高分辨率的场发射SEM价格昂贵，在国内难以推广，故有必要开发既简易实用又有高分辨率的技术。本研究根据金属喷镀复型原理［1］，建立了一实用的实验技术程序，报道如下。
材料和方法
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