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mRNA差异显示技术在肿瘤研究中的应用 |
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mob-1，不论p53蛋白是突变型还是野生型，mob-1在共转染后均高表达，可见其高表达由ras所诱导而与p53无关。mob-1编码产物为分泌性多肽，与前炎症细胞因子家族成员IP-10同源，其意义在于将慢性炎症反应，ras的活化及癌变联系起来，并有可能成为ras发生突变的分泌型分子标志物。研究者通过微细胞介导将正常的人类6号染色体转入人类黑色素瘤细胞系Me1JuSo及其高转移亚系C1861，虽然不影响其成瘤率，但抑制其转移率至少95%，提示位于6号染色体上的基因可能调控着基因组中转移抑制基因的表达，差异显示使在基因水平探讨此显著的转移抑制作用成为可能［15］。结果发现转染后激活新基因Kiss-1。将Kiss-1转染人类黑色素瘤细胞系Me1JuSo及其高转移亚系C1861并稳定表达后，接种裸鼠体内无1例发生转移。可见差异显示使研究者从表面现象的研究迅速深入到基因水平。
4.差异显示用于外源性因素作用机制的研究：人为的给予或去除某种外源性因素（如药物，激素，化学物质，紫外线）作用一段时间后，差异显示对比处理前后mRNA，在基因水平揭示外源性因素的作用机制。三苯氧胺（tamoxifen）对人类乳腺癌细胞增生具有显著抑制作用，20年来被用于临床治疗乳腺癌病人。为了探讨其药理作用，有研究者提取正常乳腺及人类乳腺癌组织在三苯氧胺治疗前，治疗中的mRNA进行对比［16］，分离到一个202 bp的cDNA(AP5-1)在正常及治疗前表达，而治疗后缺失。AP5-1与CD36基因有99%同源性，而后者为细胞外基质蛋白凝血酶敏感蛋白(thrombospondin-1)的受体。已知其参与肿瘤细胞的血行转移、浸润及血管形成。可见三苯氧胺通过使其受体下调而发挥抗肿瘤作用。宫颈细胞的癌变是多因素多步骤的过程。HPV感染是主要原因，但病毒感染者癌变的长潜伏期及少于50%的癌变率说明癌变需要其他因素共同作用，如吸烟［17］。人正常宫颈细胞(HEN)在HPV16感染后成为永生的细胞系(HEN-16)，接种裸鼠皮下不成瘤。HEN-16培养时加入香烟冷凝物作用一段时间后，接种裸鼠皮下成瘤，由此来源的细胞系称HEN-16-2。上述3个细胞系代表了宫颈癌变的两个因素，三个阶段。差异显示比较了3个细胞系的mRNA后获得新基因PA4在永生细胞HEN-16及转化细胞HEN-16-2中高表达，表达水平是正常细胞的2～3倍，而另一新基因PA9仅在正常宫颈细胞中表达。差异显示清楚的再现了HPV感染，吸烟使癌基因PA4活化，抑癌基因PA9失活而导致宫颈癌变的过程。
综上所述，差异显示技术简便易行，广泛应用于各个领域。选择各自研究领域所特有的，巧妙匹配的研究对象，应用成熟的差异显示技术，可在短时间内克隆新基因，在基因水平探讨各种生理及病理过程。
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