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定量病理学技术在大肠癌研究中的应用进展

肠癌细胞的形态因子PE越大,其预后愈差[12]。Mitmaker等人的研究认为形状因子PE指数大于0.84是预后不良的标志[13]。易平勇等人对大肠癌核的形态定量研究时注意到:核面积、核周长、核等周直径、核体积、核面积标准差的大小变化可反映五年存活率的高低,癌细胞形态表达为大核者,其预后差。核浆比率可作为结直肠癌的重要预后参数指标[14],Garson[15]等人的研究认为大肠癌病人癌细胞核的体密度较大者,其生存期长,预后较好,表明癌细胞核的定量与预后关系密切。


  2 大肠癌的DNA定量与倍体分析


  2.1 DNA定量理论的含义及定量指标


  DNA含量是指细胞内含有DNA的相对量,它能反映细胞核酸代谢情况。人的正常细胞染色体的数目和形状是相对稳定的。每一体细胞具有46条染色体,可配成23对,称二倍体;当染色体的数目整组增加,超过三倍体者称为多倍体。应用细胞分析仪进行DNA测量,可反映细胞染色体的畸变。一些研究认为,肿瘤细胞DNA呈非整倍体意味着该肿瘤为恶性[16]。细胞核DNA定量指标较常用的有:⑴DNA指数(DI):反映肿瘤细胞DNA相对含量的平均水平;⑵二倍体偏离指数(2CDI):显示肿瘤细胞DNA含量偏离二倍体的程度,文献认为该参数在表达DNA含量异常的程度较DNA指数好[17];⑶积分光密度(IOD):间接反映细胞核DNA相对含量;⑷主峰倍体值(SP):如果主峰倍体值小于1.9C或大于2.1C则可认为该样本为非整倍体,如果参照细胞的变异系数值小于3%则主峰值只要在1.94C或大于2.04C即可定为非整倍体[18]。


  2.2 DNA定量分析的方法


  目前DNA定量分析的方法主要有二种,一种是流式细胞术:这是一项用流式细胞仪对悬液中流动的荧光标记的大量单细胞进行快速精确的定量分析技术;另一种是胸态图像分析术,如图像分析仪、显微荧光光度计、显微分光光度计等,它是对显微镜下的静态细胞图像进行定量分析。夏潮涌报道目前主要采用流式细胞术(FCM)和细胞图像光度术(ICM)测量和分析细胞学样品单个完整肿瘤细胞的DNA含量的倍体,国际分析细胞学会和国际细胞学会分别为FCM和ICM作细胞核DNA含量与倍体分析推荐了统一标准[19]。Diest在评价ICM的应用时提出:虽然ICM测量速度不如FCM快,但它可以直观地检测细胞,随时测量其结构特征,在发现少有的核变化上优于FCM[20]。97年国际定量病理会议讨论了FCM在人体实性肿瘤的诊断和预后价值,并指出FCM在肿瘤发生前能提供客观诊断资料;在早期癌检测中能提高诊断效果;在确定大多数肿瘤的预后、复发、死亡等方面有显著的临床价值[21]。在DNA定量分析方法的标本应用方面除了切片外也可作涂片、印片等可作参考。


  2.3 DNA定量分析在大肠癌发生发展及诊断中的应用


  大肠肿瘤并非由正常细胞一跃而成为癌细胞,通常需有量变到质变的发展过程。大肠腺瘤被认为是大肠癌的主要来源,分析癌前细胞DNA的含量变化有助于探讨癌变的发生发展规律。国内外大量病理和临床研究资料表明:肿瘤细胞DNA非整倍体是恶性肿瘤的重要标志之一,DNA异倍体出现是肿瘤生物学行为恶性、预后不良的重要特征,测试胞核DNA含量并进行倍体分析对恶性肿瘤的病理诊断、分类分级、预后判断有重要价值[22,23]。研究发现[24]:大肠腺瘤样息肉病例肿瘤细胞DNA含量均在正常范围内,但当腺瘤样息肉伴有不典型增生和癌变时,细胞核平均DNA含量呈递增趋势,但是正常粘膜、腺瘤、腺癌各组间有较大的重叠。Seiynu等[25]人用流式细胞仪分析大肠癌细胞时发现:DNA非整倍体在腺瘤阶段已发生,这一结果不但支持了腺瘤→癌模式的理论,而且表明DNA非整倍体可能是结肠息肉恶变诊断的早期指标之一。DNA非整倍体在恶性病变前二年即可检测到[26]。有报道某些溃疡性结肠炎可以不经过异型增生阶段直接发生癌变,此时DNA倍体分析显得更有意义[27]。Hammarberg报告[28]活检系轻度不典型增生、DNA含量明显增高且DNA直方图呈二个异倍体细 胞群的慢性溃疡性结肠炎,一年后复查发现相应部位发生肿瘤,为中分化腺癌;此外慢性溃疡性结肠炎异倍体随病程延长而增加,异倍体发生率与癌变率平行。郑香玲等研究认为:恶性肿瘤的分化程度与DNA含量和倍体类型有关,分化程度越差其DNA的含量越高,高、中、低分化腺癌细胞核DNA的非整倍体不断增多,DNA含量直方图峰值向右偏离,而良性肿瘤细胞DNA含量高于正常细胞,4倍体增多[29]。


  2.4 DNA定量分析与预后

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