中国人抗肌营养不良蛋白基因缺失的分布特点

　　【Key words】　Muscutar dystrophy　　Gene deletion 　　Polymerase chain reaction　　Dystrophin

　　抗肌营养不良蛋白(dystrophin)基因突变中55%～65%为缺失，5%～10%为重复，8%左右为小的缺失和插入，点突变占25%左右［1］。dystrophin基因缺失分布在不同民族有不同的特点，如在以色列，Duchenne/Becker肌营养不良症(DMD/BMD) 患者dystrophin基因突变中缺失率较低［2］，而希腊人和保加利亚人dystrophin基因缺失的断裂点分布有其独特的特点［3，4］。我们利用12对引物(9对引物［5］加7、50和52号外显子扩增引物)检测了56例DMD/BMD患者，分析了缺失型患者dystrophin基因缺失的断裂点分布。并结合国内文献报道，共分析了274例无血缘关系的DMD/BMD患者9对引物检测的总检出率及各引物最佳组合。

　　资料和方法

　　一、资料

　　56例DMD/BMD患者均来自我院神经遗传病专科门诊，其中BMD 5例。所有患者均为男性，年龄8个月至30岁。患者中有6例两两之间有血缘关系。53例无血缘关系的病例中12例有家族史或同胞发病，占23%。除1例8个月男婴为症状前诊断外，其余患者均有典型临床表现并经肌电图、肌酶谱检查证实。此外，结合国内文献221例资料，分析9对引物的总检出率。

　　二、PCR扩增

　　9对由Chamberlain设计的引物［5］由中山医科大学遗传病学教研室提供，为了解dystrophin基因缺失在中央缺失热区的断裂点，我们根据Beggs等［6］的设计合成了50、52号外显子扩增引物。将以上11对引物分为5对、4对、3对三组：5对引物为12、17、45、48、51号外显子扩增引物，4对引物为4、8、19、44号，3对引物为50、51、52号。每次扩增均同时设空白和正常对照。缺失的外显子再以单一引物PCR扩增验证1次。为了解7号内含子的断裂情况, 我们合成了7号外显子扩增引物，引物序列如下：7F：GCATGGAAGTAAATCTCATGGAAC；7R：GTGTAG-AAATGACAAGTCTCAGATG，扩增产物为279 bp。

　　结果

　　56例患者中28例至少有1个外显子缺失。53例无血缘关系的患者中27例有基因缺失，总检出率为51%。累及中央缺失热区的缺失24例，总检出率为45%, 占检出病例的89%。根据检测结果，在27例缺失的54个断裂点中，72%的断裂点位于44～51号内含子，50%的断裂点位于45～51号内含子。确定位于7、44、50和51号内含子内的断裂点共30个，22%、17%、13%的断裂点分别位于44号、50号、51号内含子。7号内含子断裂较少，仅4%的断裂点位于该内含子。

　　结合文献资料［7-14］, 274例DMD/BMD患者9对引物的总检出率为48%。对207例有完整资料的病例分析表明，48号外显子缺失最常见，45、51、17号外显子次之，它们各自的总检出率分别为28%、20%、16%、10%，分别占9对引物检出人数的57%、42%、33%、22%。4、8号外显子缺失少见，仅占总检出率的1%、5%。两对引物的组合以48号和17号组合检出率最高，总检出率为35%，检出人数占9对引物检出人数的73%。3对引物的最佳组合为48、45和17号，总检出率为41%，占9对引物检出人数的84%。4对引物的最佳组合为48、17、45和51号，总检出率为44%，占9对引物的91%。5对引物（增加12号）总检出率可达46%，占9对引物检出人数的96%。

　　讨论

　　dystrophin基因突变55%～65%为缺失，且主要分布在两个区域。中央缺失热区位于44～53号外显子区域，占所有缺失的70%左右；5′端缺失热区位于3～19号外显子，占20%左右。Chamberlain等［5］的9对引物可检测出80%的缺失患者，Beggs等［6］又增设了另9对引物（肌肉特异性启动子、外显子3、6、13、43、49、50、52和60号），发现这18对引物可检测出98%的缺失患者。

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