生殖支原体检测方法的研究进展

　　mg1:5’TGT CTA TGACCA GTA TGT AC3’

　　mg2:5’CTG CTT TGG TCA AGA CAT CA3’

　　1991年Jensen等[16]根据Mg的粘附蛋白基因设计合成了如下组引物：

　　mgPa-1 5’AGA TGA TGA AAC CCT AAC CCC TTG G3’

　　mgPa-1 5’GAC CAT CAA GGT ATT TCT CAA CAG C3’

　　mgPa-1 5’CCG AGG GGT TTT CCA TTT TTG C3’

　　用MgPa-1 和MgPa-3成功地扩增出Mg的281bpDNA片段，5个临床分离株扩增出同样的产生，而其他支原体和细菌均为阴性，用MgPa-2作探针，对扩增产物经Southern eP印迹杂交，均为阳性，证明引物具有特异性，共检出下降大约有50个Mg细胞。1993年Jensen等[17]又根据Mg粘膜蛋白基因设计了另一对引物，即：

　　mg粘附蛋白基因设计了另一对引物，即：

　　mgPa-476：5‘ATG GCG AGC CTA TCT TTG ATC CTT TAA 3’

　　mgPa-903：5‘TTC ACC TCC CCA CTA CTG TCC TAA TGC3’

　　用来证实和补充引物MgPa-1和MgPa-3所扩增的结果，其扩增片段为453bp。研究发现，这两对Mg粘附蛋白引物的敏感性完全一致。用这种方法检测99例尿道炎病人的尿道拭子，结果17例Mg阳性，而用培养法无一例阳性。

　　1994年 Jensen[18]扩增Mg粘附蛋白基因序列并测序表明：该序列在Mg条件之间有明显异质性，为此，Jensen等学者根据原体属性高度保守区域16SrRNA的基因序列，设计了种特异性PCR引物，以期检测临床标本中所有Mg的感染：其引物序列为：

　　Mg-1，5‘GAA TGA CTC TAG CAG GCA ATG GCTG3’

　　Mg-2，5’ATT TGC TGC TCA CTT TTA CAA GTT GGCT3‘

　　4种临床标本的实验结果表明，Mg粘附蛋白的基因序列不相同，但其165rRN基因序列则是100%同源，将两种引物PCR结合，还可在可疑阳性标本中检测出10-50个Mg基因拷贝以下的Mg基因，即以16SrRNA基因为靶基因的PCR系统在保证长期特异性基础上更为灵敏。

　　赵季文等[19]采用Palmer设计的引物，扩增 mg37bpDNA片段，检测三种人群的Mg，结果是性乱人群阳性率为25.26%，性病人群为12.33%，而健康人群为3.85%。孔繁荣等[20]采用Jensen设计的MgPa-1和MgPa-3，扩增Mg281bpDNA片段，检测结果是性乱妇女Mg检出率为10.2%，STD患者为4.0%。

　　1998年，糜祖煌等[2]研究报道了分别以Mg粘附蛋白和16rRNA基因为靶基因建立的二种套式PCR检测技术，前者扩增生Mg的374bpDNA片段，后者扩增产生241bpDNA片段。套式PCR不仅提高了灵敏度，而且因采用两对不同的引物，特性也进一步的得到提高。用这些法检测40例女性STD患者，发现Mg阳性12例，阳性率30%，检出阳性率均高于普通PCR法。

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