低压缺氧治疗哮喘后血浆皮质醇BALF中嗜酸性粒细胞的变化

　　哮喘是以嗜酸性粒细胞、肥大细胞反应为主的气道慢性炎症，是我国儿童的常见病。近年来，哮喘发病率日益增加。尽管数十年来国内外学者对哮喘的治疗进行大量的研究，但迄今尚无理想的治疗方法。全国儿童哮喘疾病流行病学调查发现高原地区哮喘发病率最低(0.1%)［1］。高原气候疗法取得肯定疗效［2，3］，国内外低压缺氧治疗哮喘［4］和常压缺氧治疗哮喘［5］均见报道，但是治疗机理尚不清楚，需进一步研究探讨。本研究采用豚鼠哮喘模型，观察低压缺氧治疗后血浆皮质醇和支气管肺泡灌洗液嗜酸性粒细胞(EOS)、低密度嗜酸性粒细胞(HEO)以及肺组织病理学变化，以期探讨低压缺氧治疗哮喘的机理。
材料和方法
1　哮喘豚鼠动物模型制作及治疗
　　采用第三军医大学实验动物中心提供的健康豚鼠(动物合格证：医动字第310102011号1997年)44只，雌雄不限，体重150～200g，随机分为4组，每组11只。(1)正常组：每只豚鼠常规皮肤消毒后腹腔注射生理盐水1ml，2周后将豚鼠置入半密闭有机玻璃容器内，将生理盐水加入超声雾化器内进行雾化喷入，任动物自行吸入30分钟后取出，24小时后采集标本。(2)哮喘发作组：参照文献［6］制作哮喘模型。①致敏：每只豚鼠常规皮肤消毒后腹腔注射10%卵蛋白生理盐水1ml。②诱发：2周后将上述致敏豚鼠放入半密闭的有机玻璃容器内，将1%卵蛋白生理盐水加入超声雾化器内，行超声雾化，任动物自行吸入30分钟后取出，于激发后24小时采集标本。(3)低压缺氧治疗组：致敏诱喘方法同哮喘发作组。诱喘后第二天将豚鼠置于低压舱内，以3～5米/秒的速度减压到3000米，在舱内维持2小时，然后以同样速度加压，恢复到正常大气压，每日1次，共10次为一疗程，于第10天治疗结束后立即采集标本。(4)哮喘对照组：致敏诱喘方法同哮喘发作组，但发作后不给予任何处理，作为观察对照，在哮喘发作后第11天采集标本。实验时体重300～400g。
2　检测指标及方法
　　(1)血浆皮质醇测定：采用放射免疫法测定。
　　(2)支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞(EOS)和低密度嗜酸性粒细胞(HEO)计数：①麻醉后分离出气管，剪开气管，用适宜的导管插入气管内约1cm固定，缓慢向导管内用无菌生理盐水10ml×3进行灌洗，稍停留后轻轻回抽，回收率应>50%方能用于BALF细胞学分析，将所得支气管肺泡灌洗液离心(400×g/分钟，10分钟)，弃掉上清液，沉淀细胞用Hank s液洗三次，最后收集细胞，重悬于比重1.070的Percoll液1ml。②BALF-EOS和BALF-HEO测定：按文献方法［7］配制好不同密度的Percoll液，在10ml离心管中依次加入密度为1.100，1.095，1.090，1.085，1.080g/ml的Percoll液各1.5ml，最后轻轻沿管壁加入上述细胞悬液，离心(960×g/分钟，20分钟)，用细塑料管插入离心管，分别回收不同密度交界面的细胞层，用EOS稀释液进行EOS绝对计数，定义≤1.085密度的EOS为HEO，计算出BALF-HEO的绝对计数和百分比。
3　肺组织学检查
　　(1)光镜切片制备：各组选2只豚鼠麻醉后迅速打开胸腔，取出双侧肺组织浸泡于10%福尔马林液中固定，石蜡包埋切片、HE染色用于常规光镜检查。

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