浆液中，参照Bligh方法［4］抽提总脂2次，以二酰基甘油(DAG)激酶法测定总脂中DAG含量。
4 PKC的部分纯化和活性测定：称量组织粉末，加入4ml缓冲液A(50mM Tris/HCL,0.25M庶糖，10mMEGTA,4mMEDTA,20μg/ml Leupepetin,200U/ml抑肽酶，pH7.5)匀浆，超声波处理，取2ml匀浆液10500×g离心60分钟，收集上清即为细胞浆蛋白；沉渣再加2ml缓冲液A和1%Triton x-100，冰浴60分钟，10500×g离心60分钟，收集上清即为细胞膜蛋白，经DEAE柱层析分化后分别测定膜和浆蛋白中PKC的活性。蛋白激酶C(PKC)活性系采用PKC药盒在反应体系中加入［r-32p］ATP和人工合成八肽底物，测定底物的磷酸化。
5 形态学观察：麻醉每组3只大鼠，颈动脉插管，0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.4，含2%戊二醛)灌注固定，迅速取左室腔中部和心尖之间数块室壁中层组织块切成数小块，分别用3%戊二醛。1%锇醛固定，饱和醋酸铀过夜，丙酮脱水，环氧丙烷置换，环氧树酯618包埋，LKB机切片，在TEM-2000EX透射电镜下观察心肌细胞超微结构并照像。
取去电镜组织后的余留组织块，固定于4%中性福尔马林中，梯度酒精系列脱水，常规石蜡包埋切片，糖原染色，用BHS-2照像显微镜观察冠状动脉开口及其分枝的病变。
6 统计分析：结果以均数±标准差表示，进行方差分析和t检验。
结果
1 实验动物心功能参数
与对照组比较，糖尿病组血清胰岛素、LVSP和±dp/dtmax均显著降低，而血糖和LVEDP显著升高；在胃饲SV糖尿病大鼠，除胰岛素仍处于低水平外，血糖和心功能参数均明显改善，见表1。
表1 实验动物心功能参数(±s)
对照组 对照+SV组 糖尿病组 糖尿病+SV组
例数 10 10 6 8
血糖(mmol/L) 8.52±0.90 8.17±1.07 27.37±1.35* 10.37±1.27△△
胰岛素(pmol/L) 7.26±0.75 6.33±0.98 1.41±0.20** 1.86±0.43**
LVSP(kPa) 19.62±1.94 19.58±1.59 15.71±1.32* 18.79±2.73△
LVEDP(kPa) 0.27±0.21 0.26±0.19 1.97±0.27* 0.51±0.22△△
+dp/dtmax 860.58±30.13 805.13±25.86 588.12±17.20* 878.71±21.59△
-dp/dtmax 633.43±22.26 660.90±19.21 431.49±14.13* 735.42±23.19△
与对照组比较*P<0.05，**P<0.01，与糖尿病组比较△P<0.05，△△P<0.01
2 心肌总DAG含量和PKC活性
与对照组比较，糖尿病心肌总DAG含量明显升高，胞膜PKC活性显著增加；胞浆PKC活性降低，但无显著差异，在胃饲SV糖尿病大鼠，心肌总DAG含量和胞膜PKC活性均明显降低，接近正常水平见表2。
表2 大鼠心肌DAG含量和PKC活性(±s)
对照组 对照+SV组 糖尿病组 糖尿病+SV组
例数 10 10 6 8
总DAG含量
(pmol/mg湿重) 135.39±89.46 146.76±93.37 213.46±102.45* 158.43±94.58△
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