Na3VO4)的NaCl水。
DM组:糖尿病,链脲霉素(STZ)50mg/kg单次腹腔注射,5天后血糖≥16.7mmol/L为糖尿病模型。自由饮用NaCl水。
DV组:糖尿病饮钒组,自由饮用0.5mg/mlNa3VO4的NaCl水,使CV组和DV组摄入钒的实际量接近。
2 标本采集
(1)分组治疗12周后,代谢笼收集24小时尿,记尿量,测尿蛋白含量(PRO),尿肌酐(Ucr)。
(2)称重后麻醉,右心室取血测血糖、尿素(Urea)、血肌酐(Scr)、糖基化血红蛋白(HbA1c)、胰岛素(INS)。
(3)处死大鼠取双肾,去包膜称重,右肾部分置4%多聚甲醛中浸泡固定,另小块修成1mm×1mm×1mm大小,用1.25%戊二醛固定,用于光镜和电镜观察。
3 生化指标测定
采用CX-7自动生化分析仪(BeckMan公司产品),测血糖、Scr、Urea、Ucr,并计算内生肌酐清除率(Ccr),结果用体重校正。碘柳酸-硫酸钠比浊法测尿蛋白,并计算24小时尿蛋白排泄量(UPE)。亲和层析微柱法测HbA1c。放免法测血浆胰岛素。
4 体视学及形态学分析
常规方法制备光镜及电镜组织切片。光镜切片HE染色和PAS染色,用tiger 920图像分析仪测定肾小球平均截面积(MGPA)和平均体积(MGV)。常规方法行光镜、电镜下形态学观察。
5 统计方法
数据用平均数±标准差(±SD)表示,用统计程序包SPMR进行方差分析。
实验结果
1 体重、肾重/体重比(LKW)、MGPA、MGV的变化
如表1所示,与正常大鼠相比,饮Va的正常大鼠体重降低,LKW高,差别非常显著(P<0.01),而MPGA、MGV无显著差异(P>0.05);糖尿病(DM)大鼠LKW、MGPA和MGV均显著升高,体重降低(P<0.01)。
表1 各组体重、LKW、MGPA和MGV的变化(±SD)
分组 例数 体重(kg) LKW(10-3) MGPA(102μm2) MGV(103μm3)
NC 9 368.8±24.7 604±0.69 51.25±3.83 433.6±35.9
CV 9 297.0±27.1++ 7.62±0.49++ 52.75±4.42 443.5±40.9
DM 8 205.5±20.8++ 12.39±1.54++ 64.67±5.21++ 651.3±46.1++
DV 8 264.3±20.0++△△ 8.27±0.55++△△ 54.28±5.64△△ 458.7±38.1△△
注:与NC组比较++P<0.01;与DM组比较,△△P<0.01
饮Va治疗的糖尿病大鼠比未治疗组(DM组)体重显著升高,LKW、MGPA和MGV显著下降(P<0.01),其中MGPA、MGV与正常大鼠无显著差异(P>0.05),体重和LKW仍显著低于正常大鼠(P<0.01)。
2 血糖、HbA1c、INS的变化
表2显示:与正常对照组大鼠相比,饮Va降低了正常大鼠血浆胰岛素水平,但无统计学差异(P>0.05),Va对正常大鼠血糖、HbA1C无明显影响。
表2 各组血糖、HbA1c、INS的变化(±SD)
组别 例数 血糖(mmol/L) HbA1c(%) INS(mμ/L)
NC 9 9.07±0.98 5.67±0.53 24.37±3.07
CV 9 8.77±1.14 5.46±0.40 18.92±3.63
DM 8 30.57±2.56++ 12.56±1.06++ 9.38±1.91++
DV 8 9.77±1.22△△ 8.33±0.73++△△ 10.95&plusm
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