与方法
1.1 主要材料 人重组C5a 和金标记蛋白A (Sig-ma); C5aR单抗(S5/1), Serotec产品。
1.2 GVEC的分离和培养 剪取胎肾皮质，收集滤网中研碎的组织颗粒，经0.05%胶原酶消化，离心收集细胞，于M199完全培养液中进行常规细胞培养并鉴定。
1.3 IGSS检测 参照常规免疫组化胶体金银染色（IGSS）方法进行［3］。C5aR 单抗4℃孵育过夜。
1.4 PMN的MPO活性 分别用含5、10、1 000、2 000 ng/ml C5a的M199悬浮粒细胞，加入GVEC培养皿中，以不含C5a的粒细胞悬液为对照组，每组4个培养皿，于37℃ CO2孵箱中反应1 h。洗去未粘附的PMN，加入0.5 ml MPO保护液，刮下GVEC，并测定每组粘附的PMN中MPO活性［4］。
1.5 GVEC和PMN粘附的力学测定 将GVEC接种于3个特制的园型小室,细胞融合后分别加入200 μl 含1 000和2 000 ng/ml C5a的粒细胞悬液，以等量不含C5a的粒细胞小室作对照，CO2孵箱中反应1 h， M199洗去未粘附的粒细胞，于微管吸吮仪上测定微管刚能拉脱GVEC上PMN时所需的临界负压值即阈值ΔP，每组连续测定5对细胞，以粘附力（Fa）和相对粘附应力（S1）为定量指标［5］。Fa=ΔP*π*R2p (单位：10-4 dyn)，S1=ΔP*(Rp/Rc)2 (单位：dyn/cm2)，其中Rp为微管尖端半径，Rc为PMN半径。
1.6 统计分析 t检验，结果以±s表示。
2 结果
2.1 GVEC上C5aR的分布 IGSS检测结果如图1。镜下GVEC上有散在分布，均匀大小的黑色银颗粒，表明GVEC上分布C5aR。
2.2 MPO活性 图2显示除5和100 ng/ml C5a刺激组间无差异外, 5 ng/ml 组与对照组有显著性差异(P<0.05), 其余各组间均有非常显著性差异(P<0.01)，表明MPO活性随着C5a刺激浓度的增加而递增。
2.3 PMN-GVEC间的粘附力 测定结果如图3。 当C5a刺激浓度达2 000 ng/ml时,Fa和S1与对照组间均有非常显著性差异(P<0.01), 表明PMN与GVEC间Fa和S1受C5a刺激浓度影响,当C5a刺激浓度达2 000 ng/ml时,Fa和S1均显著增加。
图1 IGSS检测GVEC上的C5aR
Fig.1 C5aR on GVEC with immunogold-sliver staining(IGSS)
Note:A.The black sliver grain on GVEC treated with C5aR McAb(×1 000)；B.The GVEC without C5aR McAb treat
图2 C5a刺激1 h后, GVEC培养皿中的MPO活性变化
Fig.2 The activation of MPO in PMN after C5a treat with 1 h
Note:*P＜0.05；**P＜0.01 vs control
图3 C5a刺激1 h后 PMN与 GVEC间的粘附力学测定
Fig.3 The adhesion forces between PMN and GVEC after C5a treat with 1 h
Note:A.The change of adhesion forces (Fa)，**P＜0.01，VS control;B.The change of relative adhesion stress (S1)；*P＜0.05，VS 1 000 ng/ml，++P＜0.01 vs control
3 讨论
3.1 C5aR在内皮细胞上的分布 除髓样细胞外，多种组织细胞如脐静脉内皮细胞、肝实质细胞、小胶质细胞和肺泡上皮细胞等均表达C5aR, 但C5aR在同种细胞上的分布存在异质性，如不同器官组织中肥大细胞C5aR的表达，在肺、子宫和扁桃体中的肥大细胞不表达C5aR［6］。除脐静脉内皮细胞和肺血管内皮细胞表达C5aR外, 本文首次还证实在肾小球内皮细胞上也分布C5aR，并参与了细胞间的粘附。其它组织中内皮细胞上C5
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