化 按Harlow方法进行［2］。
1.3 TIGTC-Ⅲ和F(ab′)2的标记及其免疫活性测定 用氯胺T法［3］。标记物用Sephadex G-25柱分离，去除游离碘。0.22 μm微孔滤膜除菌，用细胞结合分析法测定免疫活性。
1.4 荷人肝癌裸鼠模型的建立［4］ 将PLC细胞接种在4周龄的Balb/c裸小鼠腋部皮下，待肿块长到0.8 cm3左右时进行定位及治疗研究。
1.5 放射免疫显像及抗体的生物学分布
1.5.1 动物处理 标记抗体注射前72 h起，在饮用水中加1%碘化钾，以封闭裸鼠甲状腺对碘的摄取。
1.5.2 TIGTC-Ⅲ及F(ab′)2在荷瘤裸鼠体内的分布［5］ 12只荷瘤裸鼠，每鼠注射7.4×106 Bq的125I-F(ab′)2，给药后每24 h处死3只，取肿瘤、血液及各脏器。分别称重并测其放射性算出T/NT。另取3只荷瘤鼠，从尾静脉注入125I-F(ab′)2及非特异性的131I-F(ab′)2，48 h后处死，取器官组织称重后分别测放射性计数，计算定位指数。
1.5.3 放射免疫显像 每鼠注射200 μCi/0.1 mg的131I-F(ab′)2，对照组注射相同剂量的非特异131I-
F(ab′)2，每12 h行γ照射。
1.5.4 标记抗体的生物半衰期 42只8周龄的Balb/c小鼠，分完整抗体组与F(ab′)2组。分别于给药后12、24、48、72、96、120 h处死，分离血清并加200 μl肝细胞(1×106)，测放射性计数后算出抗体的生物半衰期。
1.5.5 TIGTC-Ⅲ及其F(ab′)2的体内药代动力学 取6只8周龄Balb/c小鼠分全抗体与F(ab′)2组，给药后分别于6、12、24、48、72、96、120 h自尾静脉取血10 μl，测放射性后绘制放射性-时间曲线。
2 结果
2.1 抗体片段的制备 纯化TIGTC-Ⅲ，经电泳检测纯度大于95%。用胃蛋白酶消化，16 h以上消化完全。消化液经层析后第1峰为F(ab′)2。其产率为31.7%±2.4%。
2.2 标记抗体的质量控制 TIGTC-Ⅲ的标记率为72%，比活度为7.54 MBq/mg，放化纯度92.5%±1.7%。TIGTC-Ⅲ及其F(ab′)2标记上碘后，与PLC细胞的结合率分别为45%与28%，mIgG与其F(ab′)2的结合率均小于5%。
2.3 不同时间每克肿瘤及其它组织对TIGTC-Ⅲ及其F(ab′)2的摄取量 见表1。
2.4 不同时间的T/NT值 见表2。
2.5 定位指数 静注碘标抗体后48 h，测得定位指数TIGTC-Ⅲ为3.45，TIGTC-Ⅲ F(ab′)2为5.88。
2.6 荷瘤鼠放射免疫显像 注入抗体后24 h瘤区有放射性浓聚，36 h后肿瘤显像。显像最佳时间为全抗体96 h左右(图1，B)，F(ab′)2 36～48 h(图1，A)，mIgG整个显像过程无明显浓聚(图1，C)。
2.7 抗体的清除速率及生物半衰期 F(ab′)2在心血管的清除明显快于完整抗体，F(ab′)2的生物半衰期约20.0 h，全抗体为52.6 h左右，两者差异显著。
表1 裸鼠组织对完整抗体及其片段的摄取率
Tab.1 Percentage intake of TIGTC-Ⅲ and F(ab′)2 pergram of tissue
Tissue 24 h 48 h 72 h
TIGTC-Ⅲ F(ab′)2 TIGTC-Ⅲ F(ab′)2 TIGTC-Ⅲ F(ab′)2
Tumor 0.31 1.41 2.21 0.79 3.11 0.68
Heart 0.46 0.36 0.48 0.30 0.45 0.15
Blood 2.51 1.45 1.87 0.62 1.62 0.41
Kidney 0.91 1.75 0.92 6.87 0.76 0.59
Liver 1.62 0.50 1.86 0.32 1.27 0.20
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