抗8种主要呼吸道病毒单抗杂交瘤细胞库的建立和临床应用

1　材料与方法
1.1　第一抗体即4类8种抗病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立
1.1.1　病毒抗原来源　均严格采用标准品。流感病毒甲型和乙型毒株购于首都病毒研究所流感中心［3，4］，副流感病毒1、2、3型毒株购于美国马里兰州ATCC国际毒株库［5-7］，呼吸道合胞病毒long株由友谊医院病毒室提供［8］，腺病毒3、7型毒株由预防医学科学院病毒研究所毒株库提供［9］。
1.1.2　动物免疫　病毒采用Balb/c小鼠易感系统加脾攻击方法进行［3-9］，碱性磷酸酶采用皮内半佐剂加静脉免疫［10］。
1.1.3　细胞融合　按文献［1］常规法进行。
1.1.4　阳性孔检测　用IFA荧光法以及间接反向ELISA。
1.1.5　细胞株的鉴定　所有的细胞株要求经3次以上亚克隆，3次反复冻存，3个月的37℃环境下传代，对52株单抗做Ig亚型分析，染色体分析，每株均要求作阻断、替代、交叉、封闭以及稳定性6种特异性鉴定［3-10］。
1.2　第二抗体即兔抗鼠的制备　按文献［1］进行。
1.3　第三抗体即抗碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase，AP）单克隆抗体细胞系及其复合物（APAAP）的制备　动物免疫用的抗原系美国Promege公司产的精酶，采用反向间接ELISA检测技术获得抗碱性磷酸酶单克隆抗体细胞系，然后选择单抗最适浓度结合抗原，制成APAAP复合物［11］。
1.4　快速诊断两种技术
1.4.1　将　8　种抗呼吸道病毒单抗用于桥联（APAAP)
快速诊断技术。
1.4.2　将8种抗呼吸道病毒单抗用于间接荧光（IFA）快速诊断技术［7-9，12］。
1.5　临床应用方法
1.5.1　研究者的临床应用见文献［6-9，11，13］。
1.5.2　协作者的临床验证见文献［14-16］。
1.5.3　国外产品应用WHO标准品验证［6-9］。

2　结果
2.1　8大系单抗细胞库的建立和鉴定结果
2.1.1　建立起一个比较完整的抗主要呼吸道病毒单抗杂交瘤细胞库　1986～1997年共获8大系108株单抗细胞株：抗甲型流感11株；抗乙型流感6株；抗腺病毒3型14株；抗腺病毒7型7株；抗副流感1型18株；抗副流感2型5株；抗副流感3型22株；抗合胞病毒25株。以上8大系单抗杂交瘤细胞系的建立见文献［3-11］。
2.1.2　系列单克隆抗体Ig亚型和效价分析　见表1。
2.1.3　系列单抗的效价测定　用于临床快速诊断的以上52株单抗，平均结合病毒效价为8 000～32 000(+++，荧光法)，其连接物碱性磷酸酶单抗效价

表1　8种主要呼吸道病毒单克隆抗体Ig亚型分析
Tab.1　Analysis of Ig subtypes of McAbs against 8 types of main respiratory viruses
 

McAbs  Number1) Ig subtypes
IgG1 IgG2a  IgG2b  IgG3 IgM
FluA  11  6  2 3
FluB 5  1  　 1  　 3
PIV1  6 　 4 1 1
PIV2  5 2 1 2
PIV3  6 　 2  4

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