活动期病人18例，非活动期病人13例［3］。以SLE疾病活动指数(SLE Disease Activity Index,SLEDAI)对SLE病情活动性进行评分［4］。设其他疾病组9例(类风湿性关节炎和慢性肾炎各3例，强直性脊柱炎、多发性肌炎和白塞氏病各1例)。正常对照组14例系健康人员，女性10例，平均年龄33±9岁(21～59岁)。
1.2 方法 采用分层液密度梯度离心获取PBMC；以流式细胞仪双标记免疫荧光方法测定外周血T、B淋巴细胞Bcl-2蛋白的表达［5，6］。PBMC加入多聚甲醛使其终浓度为0.5%，4℃过夜后离心弃上清，加入0.1%的Triton100 5 min，离心弃上清，每管分别加入FITC标记的鼠抗人CD3+、CD4+、CD8+和CD19+单抗(Immunotech)10 μl，再加入兔抗人Bcl-2单抗(Dako)5 μl，混合后4℃ 60 min，PBS洗两遍，所有管都加入若丹明标记的单抗兔IgG(Immunotech)5 μl，混合后4℃60 min，以流式细胞仪(Coulter)分析每管样品中10 000个细胞，得出表达Bcl-2蛋白阳性的百分率，并测定CD3+T细胞Bcl-2蛋白表达的平均荧光强度(Mean fluorescence intensity,MFI)。
1.3 统计分析 应用美国SPSS6.0对实验数据进行Mann-Whitney U检验和Duncan秩和检验(Duncan s multiple range test)及双变量相关分析。
2 结果
活动期SLE病人CD3+、CD4+和CD8+T细胞亚群Bcl-2蛋白表达明显高于非活动期SLE病人、其他疾病组和正常对照组，CD19+B细胞Bcl-2蛋白的表达在各组之间无统计学差异(见表1)。进一步分析发现，活动期SLE病人外周血CD3+T细胞Bcl-2蛋白表达的平均荧光强度(MFI)明显高于非活动期SLE病人、其他疾病组和正常对照组(0.535 7±0.264 0对比0.164 2±0.031 0、0.158 1±0.029 0及0.138 9±0.022 0，P＜0.05)。且与SLE疾病活动指数(SLEDAI)成正相关(r=0.819 5，P＜0.01)，而与ESR、C3和C4水平无相关关系，与自身抗体ANA、抗ds-DNA及抗Sm抗体阳性率也无相关关系。
表1 SLE病人外周血T、B淋巴细胞Bcl-2的表达(x±s,%)
Tab.1 Expression of Bcl-2 protein peripheral blood T subgroups and B cells in SLE patients (x±s，%)
CD3+ CD4+ CD8+ CD19+
Active SLE 63.49±16.771) 64.32±16.291) 60.76±16.921) 78.23±11.5
Inactive SLE 14.52±10.93 14.07±11.70 15.93±11.56 80.56±10.48
Other diseases 11.47±4.97 12.44±5.77 11.00±4.98 78.59±7.52
Healthy control 9.94±4.96 14.99±20.92 10.53±4.89 81.9±6.97
Note:1)compared with healthy controls，other diseases and inactive SLE，P＜0.01
3 讨论
SLE是一种全身性多器官受累的自身免疫病，免疫学特征是B细胞多克隆活化，T细胞活化增加，产生许多自身抗体，其发病机制尚不清楚。有人报道活动期SLE病人T细胞Bcl-2蛋白表达明显增高［5，6］，且PBMC Bcl-2 mRNA表达水平明显升高［7］。我们也证实活动期SLE病人CD3+、CD4+和CD8+ T细胞Bcl-2蛋白与非活动期SLE病人有显著差异。Strasser等观察到细胞凋亡抑制基因Bcl-2对成熟T细胞具有明显效应［8］，可表达Bcl-2的外周血T细胞在培养中不仅生存期较长，而且也
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