T-PCR技术。主要步骤为将标本以12 000 r/min离心10 min，蛋白酶K消化20 min，以异硫氰酸-酚-氯仿方法从裂解液中提取总RNA，约取2.5 μg RNA再反转录合成cDNA，取cDNA液2.5 μl、TaqDNA聚合酶2 μl、引物0.5 μl、RT-buffer及dNTP进行PCR扩增(美国MJ-PTC-100)，总反应体系为25 μl，cDNA变化温度为94℃变性1 min后，94℃ 45 min、60℃ 45 min、72℃ 1 min共30个循环，72℃ 7 min，每次扩增均用蒸馏水代替标本作反应体系阴性对照。
扩增产物鉴定：取5 μl扩增物，加入1.5%琼脂糖胶进行电泳，溴化乙锭染色，于台式紫外线透射，反射分析仪观察结果，其扩增片段为302 bp，使用HaeⅢ型DNA限制性内切酶(Sigma公司产品)进行内切作为DNA标准对照物，酶切产物分别为132 bp和170 bp两个片段。取4例扩增结果阳性的正常对照组扩增物10 μl，用纯水进行梯度稀释至PCR扩增结果为阴性，以此稀释度为标准临界稀释度，将其余所有扩增产物作为模板对其进行稀释，取稀释液5 μl及引物、聚合酶、反应液等，再进行PCR扩增，总反应体系、扩增条件及观察均同前。
1.4 统计学处理 血清IL-8测定结果采用两样本均数t检验。
2 结果
22例患者及24例对照者宫颈脱落细胞IL-8正常扩增结果均为阳性，但模板稀释后扩增结果为患者组16例阳性(73%)，对照组5例阳性(21%)，两组有明显差异，见图1；血清IL-8测定结果患者组含量±s为23.8±17.6 pg/ml，对照组为21.3±18.2 pg/ml，两组比较无明显差异(P＞0.05)，见图2。
图1 正常人及患者宫颈细胞IL-8阳性例数的比较
Fig.1 Comparison of the positive examples of IL-8 in normal persons with patients
图2 正常人及患者血清IL-8含量比较
Fig.2 Comparison of the IL-8 content in serum between normal persons and patients
3 讨论
关于IL-8在妇产科方面对宫颈作用的研究国外已有报道，多认为与宫颈成熟、宫颈扩张、抗感染以及不孕有关等［1-8］。EI Maradny等的资料表明IL-8能使宫颈以类似于正常生理过程成熟的因素之一［2］。Schulte等研究细菌侵入人类上皮细胞的不同分泌现象时指出，宫颈上皮细胞(Hela细胞)分泌的IL-8是防止细菌入侵的一道防线［3］。Osmers等在剖腹产中取子宫下段活检，发现IL-8在宫颈扩张过程中扮演着重要的角色［4］。Kanayama等的实验表明尿胰蛋白酶抑制剂(UTI)能抑制IL-8诱导宫颈的成熟［5］。EI Maradny等对连续的宫颈组织(经过IL-1β处理后)发现中性白细胞增多，又发现经过治疗的宫颈IL-8明显增高［6］。Maradny等在了解宫颈中硫酸脱氢表雄酮(DHA-S)对IL-8的作用时指出IL-8是由宫颈激素调节，DHA-S对其有协同作用［7］。
我们对患者宫颈脱落细胞IL-8表达的半定量研究和IL-8血清含量的测定做了初步研究，22例宫颈糜烂和24例正常成熟的宫颈脱落细胞IL-8正常扩增结果均为阳性，经模板稀释后扩增结果为患者组73%阳性、对照组21%阳性，两组差异明显，实验选择患者轻、中、重度每种例数接近，故结果有代表性，IL-8与炎症反应有密切关系，是一种重要的炎症和免疫调节物质，是机体免疫功能反应的表现。Sagawa等对239例病人采用免疫荧光测试盒进行细胞激动素粒细胞弹性蛋白酶检测结果，这类细胞激动素包括IL-8与抵抗阴道的感染上行防御机制有关，这与我们的结论一致［8］。
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