人白细胞分化抗原CD59基因克隆及序列分析

白　云　姜　曼　朱锡华

　　中国图书分类号　R392.11
　　摘　要　目的：为了获得人CD59 cDNA完整序列，以建立表达人CD59分子的小鼠T细胞模型，更深入地探讨补体MAC及CD59分子与T细胞活化的关系。方法：通过设计和合成引物、提取细胞总RNA进行逆转录反应，经PCR扩增目的片段，并将其克隆于pUC18及pUC19质粒上，测定其DNA序列。结果：从Jurkat细胞总RNA中扩增得到396 bp片段，序列测定证实该片段为包括25aa信号肽在内的全部CD59编码序列。结论：表明CD59 cDNA已成功地得到克隆。
　　关键词　CD59　RT-PCR　基因克隆　序列分析

Molecular cloning and sequencing of human CD59

BAI Yun,JIANG Man,ZHU Xi-Hua.
Department of Immunology,The 3rd Military Medical University,Chongqing 400038

　　Abstract Objective：CD59,with multiple functions,is a widely expressed cell surface glycosyl-phosphatidyl inositol(GPI) anchored glycoprotein.It acts as an inhibitor of the assembly of the membrane attack complex of autologous complement,binds to CD2,and also transduces activation signals in T cells.The purpose of this study is to obtain the cDNA sequence encoding humam CD59.Methods：The primers are designed based on the known CD59 cDNA sequence.Total RNA was isolated from cultured Jurkat cells,and then RT-PCR was performed.The fragment was cloned into pUC18 and pUC19 plasmids,and further sequenced by sanger 　s-dideoxy-mediated chain termination.Results:A 396 bp DNA fragment was amplified by RT-PCR method from Jurkat cells.This cDNA fragment includes 384 bp open reading fragment and it s sequence is identical to the published sequence encoding human CD59.Conclusion:CD59 cDNA has been cloned successfully.
　　Key words CD59 RT-PCR Gene clone Sequencing analysis

　　CD59是一种广泛分布于组织细胞表面的GPI锚固糖蛋白，具有多种重要的免疫功能［1］。首先，它作为补体系统终末阶段的调节蛋白，以同源限制的方式抑制攻膜复合物C5b-9的生成，保护自身正常组织细胞免受补体损伤［1，2］，其异常和缺损是导致夜间阵发性血红蛋白尿(PNH)的直接原因［3，4］。其次，GPI锚固的CD59是一个重要的信号转导分子，参与了单核细胞、粒细胞、血小板、T细胞的活化信号转导过程，尤其是在T细胞活化中的辅助作用倍受人们的关注［5-7］。此外，越来越多的研究表明，CD59在微生物及肿瘤的免疫逃避、异种器官移植超急排斥反应、自身免疫性疾病及生殖免疫病理方面都具有重要的意义，并且在PNH的治疗、超急排斥反应的控制及多种免疫性疾病的治疗方面显示了良好的应用前景［8］。
　　为了深入研究CD59功能，探讨其生理及病理意义，本文利用多聚酶链反应，扩增得到了CD59分子的全序列基因片段，并将其克隆于pUC19\,pUC18质粒上，进行DNA序列分析，为进一步表达CD59分子并进行其它功能的研究奠定了基础。
　　
1　材料与方法
1.1　主要

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