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]。PBMC以2×106 ml-1接种于含CD3 McAb(1.0 μg/ml)+rIL-2(200 U/ml)的RPMI 1640完全培养液(TCM)中激活培养,并适时扩增。
1.3.2 NK细胞 PBMC接种在TCM中培养,作为测定T-AK活性中NK活性的效应细胞。
1.3.3 LAK细胞 PBMC接种于含200 U/ml rIL-2的TCM中培养,作为测定T-AK活性中LAK活性的效应细胞。
1.3.4 CD3AK细胞 PBMC接种在含CD3McAb1.0 μg/ml的TCM中培养,作为检测T-AK活性中CD3 AK活性的效应细胞。上述细胞培养72和120 h后,以K562细胞和Raji细胞为靶细胞,改良MTT法测定活性[4]。
1.3.5 T-AK细胞上清液制备及抑瘤活性 参见文献[5],结果以抑制率(IR)表示。
1.4 T-AK细胞免疫表型分析 采用APAAP桥联酶染色法[6]。结果以阳性细胞百分率(%)表示。

2 结果
2.1 T-AK上清液的抑瘤活性 T-AK细胞与K562细胞(20∶1)混合培养24 h的上清液,体外抑制K562细胞和Raji细胞的增殖,同时对其它肿瘤细胞亦有抑制作用[5]。
2.2 T-AK细胞活性中的CD3AK活性、LAK活性和NK活性 分别检测T-AK细胞激活培养体系中各刺激物质所诱生的杀伤活性,发现T-AK细胞活性由多种活性成分组成,其中CD3McAb激活的CD3AK活性约占50%,rIL-2活化的LAK活性约占30%;NK活性约为10%,杀瘤过程中释放的可溶性抑制性因子约为10%(表1);但培养时间不同,靶细胞不同,各类活性所占比例有所不同(数据未列)。分别测得的各杀伤活性的总活性高于T-AK活性,可能与检测时T-AK活性中各效应细胞活性的部分重叠(如LAK和NK)、分别检测的误差等因素有关。
2.3 T-AK细胞的免疫表型 从PBMC中诱生、扩增培养的T-AK细胞形态具有活化淋巴母细胞的特点,其免疫表型中CD3+93%,CD8+91%,CD16+22%,CD56+47%,CD25+41%,CD38+96%,HLA-DR+64%,证明T-AK细胞为表达活化T淋巴细胞和NK细胞表面标志的异质细胞群。

表1 T-AK细胞杀伤不同靶细胞的细胞毒活性成分(培养时间为120 h,E/T为20∶1,n=4,±s)
Tab.1 The components of the cytotoxicity of T-AK cells against different target cells(induced for 120 h,effector:targer=20∶1,n=4,±s)
 

Effectors Cytotoxicity(%)
K562 Raji
T-AK 89.86±10.04 78.13±6.67
CD3AK 48.67±2.18(0.50) 40.00±7.89(0.49)
LAK 28.18±4.87(0.29) 32.00±2.24(0.39)
NK  9.24±1.04(0.10)  1.87±0.97(0.02)
Supernatant 10.47±3.34(0.11)  8.48±2.19(0.10)
Sum of 4 activities     96.56(1.00)     82.35(1.00)

Note:The numbers in the parent heses show the activity proportion of each effector in the sum of the activities of the four effectors in T-AK cytotoxicity

3 讨论
  CD3单抗和IL-2共同激活诱生的T-AK细胞形态学上具有活化淋巴母细胞的特征,细胞表型以CD3+、CD8+淋巴细胞为主,约有20%~50%细胞为CD16+,CD56+NK样细胞,并表达IL-2R(CD25+)CD38,MHC Ⅱ类抗原(HLA-DR+)等活化T淋巴细胞的表面标志。CD3McAb主要激活T细胞,而rIL-2既可作用于T细胞,也可活化NK细胞[1,3,4]。因此,T-AK细胞具

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