L-2 1 000 U/ml诱导LAK细胞；用rhIL-2 200 U/ml、CD3单抗培养上清20 μl/ml诱导CD3AK细胞。均诱导8～10 d。
1.3 纯化NK细胞的制备［5］ 以补体依赖细胞毒法去除LAK细胞中的T细胞，剩余细胞即为较纯的NK细胞。即将LAK细胞悬液加入抗CD3单抗培养上清，37℃ 30 min后加新鲜兔血清，37℃ 1 h，以去除其中的T细胞。用淋巴细胞分离液分离活细胞，并经表型测定(间接SPA法)确定为NK细胞。
1.4 细胞毒活性测定 用MTT法，将K562细胞先与不同量的HLA-ABC或HLA-DR单抗上清或腹水作用30 min后，洗3遍，再加效应细胞，并设不加单抗对照组，效靶比为10∶1。采用10%SDS溶解甲颗粒［6］。
2 结果
2.1 HLA-ABC单抗对外周血NK细胞杀伤能力的影响 HLA-ABC单抗与靶细胞作用后靶细胞对NK杀伤的敏感性有提高的趋势，以2.5 μl单抗腹水组提高幅度最大(P＜0.01)。各浓度的HLA-DR单抗培养上清及腹水对其杀伤力无明显影响，见图1。
图1 抗MHC I类单抗对新鲜NK细胞杀伤能力的影响
Fig.1 Effect of anti-MHC I MoAb on cytotoxicity of fresh NK cells seperated from peripheral blood
2.2 HLA-ABC单抗对LAK细胞中纯化NK细胞杀伤能力的影响 HLA-ABC单抗与K562细胞作用后，LAK细胞的杀伤率略有所降低。而去除T细胞后的纯化NK细胞的杀伤有提高的趋势，以5 μl单抗腹水组提高最明显(P＜0.01)。各浓度的HLA-DR单抗培养上清或腹水对LAK及NK细胞的杀伤均无影响，见图2。
图2 抗MHC I类单抗对LAK和纯化NK细胞杀伤能力的影响
Fig.2 Effect of anti-MHC Class I MoAb on cytotoxicity of LAK cells and purified NK cells
2.3 HLA-ABC单抗对CD3AK细胞杀伤能力的影响 HLA-ABC单抗与靶细胞作用后，靶细胞对CD3AK细胞杀伤的敏感性明显降低(P＜0.001)，见图3。
图3 抗MHC I类单抗对CD3AK细胞毒活性的影响
Fig.3 Effect of anti-MHC Class I MoAb on cytotoxicity of CD3AK cells
3 讨论
现已发现，NK细胞存在识别靶细胞表面分子的触发性受体(Killer-cell activatory receptors,KARs)和杀伤抑制性受体(Killer-cell inhibitory receptors,KIRs)。杀伤抑制性受体识别靶细胞上的MHC I类分子，并传递阴性信号［2，3］。因此，NK细胞对MHC I类分子表达量高的靶细胞杀伤力弱或不杀伤，对MHC I类分子缺乏或突变的靶细胞则杀伤能力强。用MHC I类基因转染后，可使对NK裂解敏感的靶细胞转为完全或部分抵抗。
本文用MHC I类单抗与靶细胞事先孵育后，发现外周血新鲜NK细胞及纯化NK细胞对靶细胞的杀伤率有提高的趋势。由于NK细胞也能通过ADCC作用杀伤靶细胞，我们用鼠抗人HLA-DR单抗培养上清或腹水与靶细胞K562孵育作为对照组，发现不能增加NK细胞的裂解能力(见图1，2)。在以前的试验中曾用其他非MHC类单抗(如鼠抗人IL-6、IL-1单抗，均属IgG类)与靶细胞孵育后，均不增强NK杀伤的能力。因此，可以说明本试验NK杀伤能力的提高并非是由于NK细胞ADCC的作用。提示靶细胞上的MHC I类分子被单抗封闭后，使NK细胞的杀伤抑制性受体不能识别MHC I类分子而阻止了阴性信号的传导，从而使NK细胞杀伤能力明显增强。国外学者曾在测NK细胞毒活性之前先用鼠抗人HLA-DR单抗与靶细胞孵育或直接用HLA-ABC单抗的(Fab)’2片段与靶细胞作用来消除ADCC的影响，均得到类似的结果［7，8］。CD3AK细胞是以T细胞为主的异质性群体，与NK细胞相反，T细胞，尤其是CTL细胞，通过识别靶细胞上的MHC I类分子传递阳性信号而杀伤相应的靶细胞。MHC I类单抗能遮蔽CTL细胞的MHC识别位点而阻止CTL的杀伤，
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