B16黑色素瘤与活化B淋巴细胞融合瘤细胞免疫原性的改变

陈习武　秦慧莲　何球藻

　　中国图书分类号　R392.3　R730.51
　　摘　要　目的：了解肿瘤细胞与活化B淋巴细胞的融合能否提高前者的免疫原性。方法：分别取亲本B16黑色素瘤和融合瘤细胞B16.B主动免疫同系小鼠，观察免疫小鼠脾脏淋巴细胞(SPL)对亲本瘤细胞体外再刺激的反应能力。结果：发现B16.B免疫小鼠SPL较B16免疫小鼠SPL有更明显的增生反应，同时前者还能分泌更高水平的细胞因子(IL-2、IFNγ和TNFα)。结论：与亲本肿瘤相比，融合瘤细胞的免疫原性有明显提高。
　　关键词　黑色素瘤　细胞融合　混合淋巴细胞肿瘤细胞培养

The enhancement of immunogenicity of B16 melanoma fused with activated B lymphocytes

CHEN Xi-Wu,QIN Hui-Lian,HE Qiu-Zao.
Department of Immunology,Shanghai Medical University,Shanghai 200032

　　Abstract Objective：To make sure if fusing with activated B lymphocytes could improve the immunogenicity of tumor cells.Methods：The syngenic mice were immunized with parental B16 tumor cells and B16.B fusing cells.Then,SPLs of immunized mice were co-cultured in vitro with parental B16 cells,the proliferation of SPLs and the secretion of certain cytokines were assayed.Results:SPLs from B16.B immunized mice showed more potent proliferation and could produce higher level IL-2,TNFα and IFNγ in response to B16 stimulation.Conclusion:The immunogenicity of fused cells is higher than parental tumor cells.
　　Key words　B16 melanoma Cell fusing Mixed lymphocytes tumor cell cultur

　　疫苗主动免疫能够调动机体的免疫功能。由于肿瘤细胞免疫原性太弱，用于主动免疫时通常难以诱发出有效的免疫应答反应。通过肿瘤细胞与活化的B淋巴细胞融合途径来修饰肿瘤细胞的目的在于提高其免疫原性，以制备肿瘤疫苗［1］。我们用融合后的瘤细胞主动免疫小鼠，观察免疫宿主的脾细胞能否在体外对瘤细胞产生再次特异免疫应答。

1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　病毒、细胞与动物　水泡性口炎病毒(VSV)，液氮冻存。B16黑色素瘤(H-2b)和L929(小鼠纤维瘤细胞)均由第二军医大学免疫学教研室曹雪涛教授惠赠，WEHI-164(小鼠纤维肉瘤)和EL4(小鼠胸腺瘤，H-2b)由美国华盛顿大学医学院肿瘤系Disis教授惠赠，本室保种传代。C57BL/6小鼠，清洁级，雌性，6～8 w,购自中英合资上海必凯实验动物公司。
1.1.2　主要试剂　RPMI1640培养基，购自Gibco公司；四甲基偶氮唑蓝(MTT)，购自华美公司；氯化锂(LiCl)，上海新海化工厂产品；放线菌素D(Actinomycin D),购自华美公司；3H-TdR 37 MBq/ml，上海原子能研究所产品；丝裂霉素C(MMC),日本协和制药株式会社产品；Alamar Blue,Biosource International公司产品，Disis教授惠赠。
1.2　方法
1.2.1　动物免疫和脾细胞制备［2］　取B16(H4)细胞(经克隆筛选的H-2Kb，Db阴性的B16瘤株)、融合瘤细胞〔B16(H4)和活化B淋巴细胞的融合瘤细胞，在体外经过短期培养，荧光双标记检测显示B7阳性率为27.1%，H-2Kb阳性率为72.8%〕，以MMC灭活后分别腹腔免疫C57BL/6小鼠，

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