抗Fas抗体诱导人肾小球系膜细胞凋亡

陈　明　刘晓惠　黄颂敏　屈燧林　刘先蓉　许国章　刘　聪

　　中国图书分类号　R392.12
　　摘　要　目的：研究抗Fas抗体对人肾小球系膜细胞的致凋亡作用，探讨Fas-FasL在肾脏损伤中的作用。方法：常规方法分离、培养人肾小球系膜细胞(Mcs)，并传代鉴定，用不同浓度的抗Fas抗体(0,2,5,10 μg/ml)刺激4～6代Mcs 16 h后，荧光染色观察Mcs凋亡变化，二苯胺法和DNA凝胶电泳方法定量和定性分析Mcs DNA片段化变化。结果：抗Fas抗体可诱导Mcs凋亡，且致凋亡效应呈依赖性关系。结论：Fas-FasL系统在Mcs凋亡中起着重要作用。
　　关键词　Fas-FasL　抗Fas抗体　系膜细胞

Anti-Fas antibody induce apoptosis in cultured human glomerular mesangial cells

CHEN Ming，LIU Xiao-Hui，HUANG Song-Min et al.
Department of Nephrology, the First University Hospital West China University of Medical Science,Chengdu 610041

　　Abstract Objective：To investigate the mechanism inducing apptosis of human glomerular mesangial cells (Mcs) by anti-Fas antibody.Methods: Msc were cultured with anti-Fas antibody (anti-Fas Ab) at different concentrations for 16 hrs. Apoptosis of Mcs was evaluated and qualifed by acriding orange (AO) stained and DNA fragmentation assay. Results: Anti-Fas antibody was found to be able to induce apoptosis in culture human masangial cells and the effect of anti-Fas antibody inducing apoptosis was dose-dependent.Conclusion:Fas and its ligand could play a an role in the injury of human glomerular cell.
　　Key words　Fas-FasL　Anti-Fas antibody　Human mesangial cell

　　细胞凋亡在肾脏疾病的发生和发展过程中起重要作用，但其机制尚不清楚［1］。研究表明Fas抗原存在于多种细胞表面，一旦被激活可介导细胞凋亡［2］。本文拟用Fas配体(FasL)的协同剂——抗Fas抗体研究Fas-FasL系统对人肾小球系膜细胞(Mcs)的作用，旨为研究肾小球疾病开拓新的理论思路。

1　材料与方法
　　取新鲜正常人肾组织在无菌条件下去除肾包膜，按谌氏的方法［3］重叠过筛分离并用IV型胶原酶(Sigma Chemical Co) (300 U/ml)消化肾小球。用RPMI1640培养肾小球，直到细胞布满瓶底后，用0.25%胰蛋白酶-EDTA (Sigma Chemical Co)消化细胞后传代培养。取第4～6代细胞经形态学鉴定(相差显微镜、透射电镜、扫描电镜)及抗胸腺细胞抗体，抗Desmin抗体免疫荧光鉴定证实为系膜细胞(Mcs)后。取第4～6代Mcs，以1×104/孔接种于24孔培养板上，待细胞贴壁过夜后，换成无血清RPMI1640液，继续孵育48 h，使细胞同步于G1期，去上清液后分成对照组、实验组A、B、C 4组，分别加入羊血清IgM 2 μg/ml，抗Fas抗体(Santa Craz Co)2\,5和10 μg/ml各1 ml，继续培养16 h。收集Mcs作下列凋亡检测(Ao)。
1.1　Mas凋亡的形态学观察　将2 μl吖淀橙染液(100 mg/ml)加50 μl待观察Mcs悬液中充分混匀后，再加入1%多聚甲醛溶液40 μl固定细胞后，于24 h内荧光镜下(以细胞

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