A蛋白基因在枯草杆菌R25及地衣芽孢杆菌NM105中的表达

张尤新　王桂忱　章银梅　汤懋盓　

　　中国图书分类号　R392.11
　　摘　要　目的：测定A蛋白基因在R25及NM105中的表达情况。方法：根据A蛋白基因产物——A蛋白能特异地与许多动物的免疫球蛋白的Fc段结合这一特性，采用ELISA检测法测定。结果：在细菌生长对数期，表达量与酶活性都在快速上升，在细菌生长平台期，表达量呈下降趋势。加中性蛋白酶抑制剂，使表达量提高了46%，低酶活性培养基的表达量是LB培养基的7.4倍，在碱性蛋白酶缺失的R25中的表达量是NM105的1.6倍。结论：A蛋白基因表达量与胞外蛋白酶活性关系极为密切。
　　关键词　A蛋白基因　A蛋白　表达　枯草杆菌

Expression of protein A gene in R25 and NM105
ZHANG You-Xin,WANG Gui-Chen,ZHANG Yin-Mei et al.Institute of Genetics,Academia Sinica,Beijing 100101

　　Abstract Objective:Determined the expression condition of protein A in R25 and NM105.Methods:By ELISA and based on specific property that the protein A can be specifically combined with Fc fragment of immunoglobulin of many animals.Results:The protein A gene expression degree and protease activity both increased rapidly in logarithmic growth phase,and the protein A gene expression degree can raise 46% by adding neutral protease inhibitor.The quantative of protein A in the low enzyme activity medium was 7.4 fold of that in LB medium.And in R25,a alkaline protease deletion mutant,was 1.6 fold of that in NM105.Conclusion:The result of the expression condition of protein A gene in R25 and NM105 showed that the expression of protein A gene was connected with out-cell protease activity seriously.
　　Key words　Protein A gene　Protein A　Expression　Bacillus subtilis

　　基因工程的宿主系统大肠杆菌是现代分子生物学研究中最常用的材料之一。而枯草杆菌作为基因工程的另一个宿主具有许多优于大肠杆菌的特点。目前国际上用于基因工程宿主研究的枯草杆菌都来源于168菌株。枯草杆菌Ki-2由中国科学院遗传研究所汤懋盓等于1964年鉴定为可转化菌株，它与168株相比具有许多优点［1-3］。作为一个新建立的遗传工程系统，一系列研究工作都在进行之中。为了进一步检测该系统，同时也为了得到目前医学、免疫学及分子生物学广泛应用的外源基因表达产物——A蛋白，本实验开展了国内少报道的外源基因——A蛋白基因在Ki-2-132株R25中的表达，通过一系列实验结果的观察比较，对该系统在外源基因表达上的影响进行了初步探讨。
　　本实验表达的A蛋白是存在于某些金黄色葡萄球菌膜表面的一种蛋白质，在免疫学及分子生物学等方面有着广泛的应用价值［4-6］，来源及产量有限。1984年Uhlen等利用重组DNA技术从金黄色葡萄球菌中克隆出A蛋白基因［7］，以后又有人在大肠杆菌中实现了表达［8］。通过本实验的研究，经过不同条件的处理，得到不同产量的A蛋白。该遗传工程系统对外源基因表达的影响为今后的研究提供理论和技术上的积累。
　　
1　材料与方法
1.1　菌株与质粒　枯草杆菌Ki-2-132株，来自中国科学院遗传所。携带A蛋白

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