肌酐酶法测定的两点法

杨昌国　吕邦太　许叶　单才华　陈英其　罗敏　徐朝阳

摘要　建立了实用的肌酐酶法测定方法,通过实验将比色测定终点法改为两点法,使其适合自动分析，并节省工具酶。本法的线性为0～2749 μmmol/L，精密度：手工操作，批内CV<3%,总CV<5%。三种分析仪的批内CV在0.34%～1.44%间，回收率99.66%～100.9%。本法(Y)和BM的试剂(X)比较：Y=0.973　X+10.33 μmol/L,r=0.9995。
关键词　肌酐；酶法；两点法

Automatic analysis of enzymatic colorimetry for
creatinine assay

YANG Changguo，LU Bangtai,XU Ye,et al
(Ningbo Center for Clinical Laboratory,Ningbo Zhejiang　315000)

Abstract　A practical method of creatinine enzymatic estimation was established.This colorimetry was changed from end point assay to tow point assay by experiment so that one can used in automatic analysis and the tools enzymes were saved in reagent.Analysis index of this method:linerity was 0～2749 μmol/L;total CV and within-run CV were ≤5.0% and ≤3.0% respectively for manual,and within-run were 0.34%～1.44% for three autoanalyzer,analytical recoveries were 99.66%～100.9%，correlation between results by this method(Y) and BM′s reagent(X) were Y=0.973 X+10.33 μmol/L，r=0.9995.
Key words　creatinine；enzymatic method；tow point assay

　　酶法测定肌酐目前已报告的有四条途径[1～5]，其中三种为紫外测定，一种为比色测定。相比之下比色测定具有更多优越性，商品试剂盒多采用此法。但Fossati原法[1.2]的反应时间较长，且要做一血清空白以除去血清中肌酸的干扰，因此不适合自动分析。自动分析一般总反应时间为10分钟，为了除去肌酸的干扰必须采用两步法，反应要求5分钟内达到终点。据我们实验，必须将几种工具酶的用量增加到Fossati原法的5～10倍。在实验过程中我们还发现几种工具酶的水解速率均较缓慢，反应的线性时间较长，因此将其改成两点法或速率法测定，取得很好的结果。

1　原理
　　第一步反应：排除肌酸干扰

　　第二步反应：测定肌酐

肌酸反应同第一步。

2　材料和方法
2.1　仪器　自动分析仪HITACHI 7170,Beckman Synchron △CX5和Ciba Coring Express Plus。分光光度计Beckman DU-640。
2.2　原料试剂　肌酐酰氨基水解酶(Cretininase,CRNase);肌酸脒基水解酶(Creatininase,CRTase);肌氨酸氧化酶(SO)；棘根过氧化物酶(POD)，抗坏血酸氧化酶(ASO)，均为Boehringer Mannheim公司产品。3，5-二氯-2-羟-苯磺酸(DHBA)，4-氨基安替比林(4-AAP)和肌酐为Sigma公司产品。
2.3　应用试剂　试剂Ⅰ：每L磷酸盐缓冲液(150 mmol/L,pH 7.5)中含CRTase 20 kU,SO 6 kU,POD 1 kU,ASO 1 kU,DHBA 3 mmol,K4Fe(CN)6 20 μmol,和4-AAP 4 mmol。试剂Ⅱ：每L含CRNase 50 kU。参考物(177 μmmol/L):精确称取肌酐20 mg溶于1L经透析的混合血清中。
2.4　测定方法　自动分析通用参数：反应类

[1] [2] 下一页