低密度脂蛋白亚组分氧化易感性的检测及临床应用

2　结果
2.1　LDL的氧化曲线　脂蛋白内多聚不饱和脂肪酸(PUFAS)被氧化形成共轭双烯(Conjugated dienes,CD),于波长234 nm处有最大吸收峰，ε=29 500 L.mol-1.cm-1。根据LDL氧化产生的CD量随时间变化绘制氧化曲线(图1)，可分为三个阶段：a.延滞阶段：以延滞时间(min)表示，反映LDL抗氧化能力的大小。b.增殖阶段：以最大斜率表示CD最大生成率(nmol CD/mg LDL.min-1)。c.降解阶段：生成的总CD值(nmol CD/mg LDL)表示，反映LDL氧化程度。

Figure 1　Curve plot of in vitro oxidization of LDL
图1　低密度脂蛋白氧化曲线

　　LDL氧化修饰反应条件的选择：不同脂蛋白浓度、Cu2+浓度、温度都会改变氧化曲线。脂蛋白浓度为0.05 g/L时，观察不同Cu2+浓度、温度对氧化曲线影响：在1～5 μmol/L Cu2+浓度时，浓度越高，延滞时间越短，5～20 μmol/L Cu2+浓度对氧化曲线影响不大(图2)；随着温度升高延滞时间缩短，CD最大生成率略有上升，而总CD值不变(图3)。最终选择Cu2+浓度10 μmol/L、37℃为测定条件。

▲2.5 μmol/L　+5.0 μmol/L　□12.5 μmol/L　■20 μmol/L
Figure 2　Influence of different Cu2+ level to
curve plot of in vitro oxidization of LDL
图2　Cu2+浓度对LDL氧化曲线的影响

▲20℃　 ■30℃　□37℃
Figure 3　Influence of different temperature to
curve plot of in vitro oxidization of LDL
图3　温度对LDL氧化曲线的影响

2.2　冠心病患者LDL亚组分抗氧化性(见表1)。

表1　冠心病患者LDL亚组分抗氧化性
Table1　Susceptibility to in vitro oxidation of
LDL subfractions from the CHD patients
 
LDL 　Pattern B 　Pattern A
Lag time(min) 　66.5±27.0* 　85.5±41.5
Rate of oxidation
(nmol CD/mg LDL.min -1　) 　1.53±0.81 　1.42±0.85
Amount of dienes
(nmol CD/mg LDL) 178.3±87.8** 115.9±39.3
*P<0.05，**P<0.01
　　冠心病患者B型LDL较A型延滞时间明显缩短；氧化速率无变化；总氧化值显著升高。示B型LDL较A型易于氧化，且氧化程度增高。
3　讨论
　　氧化LDL在As的发生中起着关键作用。LDL颗粒的大小、密度及组成等与其抗氧化性相关。众多方法可检测脂蛋白氧化产物,LDL氧化易感性因同As发生、程度高度相关而倍受重视。我们参考文献[4]建立了LDL氧化产物共轭双烯测定法,比较了不同浓度Cu2+、不同温度条件下的氧化曲线变化。Henne等［5］指出Cu2+浓度在0.5～3 μmol/L时,浓度越高,延迟时间越短,而超过15 μmol/L时，则变化不大；反应温度在25℃～35℃时，延滞时间随温度升高而下降，可能是由于温度越高链式反应

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