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应类型速率法，主波长405 nm，副波长不选，温度37℃，样品体积(SV)5 μl，试剂体积(TV)250 μl，读数时间3点～10点(相当于39.8秒～179.3秒)，
CNP的毫摩尔消光系数［2］，pH 6.0，比色皿光径1 cm,ε＝14.58 L.mmol-1.cm-1。
2.4 比较方法 按厂家说明书参数测定。
3 实验结果
3.1 底物浓度的选择 取急性胰腺炎病人标本两份(Amy活力分别为371 U/L和1 546 U/L)，分别配制含Gal-G2-α-CNP终浓度为0.7，1.40，2.80，5.60，11.2 mmol/L，其余条件同应用试剂，测定酶活力，用双倒数作图法求得Km＝0.48 mmol/L，因此我们选定Gal-G2-α-CNP浓度为5.0 mmol/L。
3.2 最适pH的选择 分别用50 mmol/L的Bis-Tris/HCl配制成pH 5.50、5.85、6.05、6.11、6.45五种缓冲液，结果显示最适pH为6.05～6.11。
3.3 NaN3对淀粉酶测定结果的影响 配制工作液中含NaN3 154 mmol/L(Y)和原工作液(X)测定样品20份，酶活力范围11～2 240 U/L，经相关分析Y＝1.36X＋12.4，r＝0.98，经配对t检验(P＜0.01)，两者差别具有显著意义，说明NaN3具有明显激活作用。
3.4 α-葡萄糖苷酶对Amy测定结果的影响 配制工作液中含α-葡萄糖苷酶10 kU/L(Y)和原工作液(X)测定样品20份，酶活力范围为11～2 240 U/L，经相关分析：Y＝1.03X＋3.2,r＝0.9993。经配对t检验(P＞0.10)，说明α-葡萄糖苷酶对Amy测定无影响。
3.5 评价实验
3.5.1 反应动力学(淀粉酶活力为401 U/L) 延滞时间＜15 s，线性期可达600 s(读数点33)。
3.5.2 线性 选择一份Amy为2 240 U/L的病人血清用蒸馏水作倍比稀释，线性至少可达2 200 U/L。线性回归方程Y＝1.013X－2.5，r＝0.9994。
3.5.3 批内精密度 取同一样品平行测定20次，CV为1.42%，批间精密度：CV为2.33%。
3.5.4 稳定性 试剂空白速率 ΔA/min＜0.001，4℃存放1个月，空白吸光度＜0.12。
3.5.5 方法比较 选择病人血清40份(Amy活力11～2 240 U/L)，同时用本法(Y)和EPS法(X)测定，经回归分析：Y＝1.27X＋0.50，r＝0.9990。经配对t检验，P＜0.01，两者差别具有显著意义
3.6 参考值 用本法测定献血员100例，因测定结果不呈正态分布，故用百分位数统计，以95%高限血清为137 U/L，参考范围32～137 U/L。
4 讨论
4.1 淀粉酶能水解3个葡萄糖单体以上的以α-1，4糖苷键相连的麦芽寡糖，Winn Deen［2］等经实验证实Amy对G3-CNP比G3-pNP的催化速度快10倍，从而使G3-CNP可作为α-淀粉酶的底物。根据IFCC所提出的理想的测定方法条件：要求不使用辅助酶，反应产物具有确定的结构，产物组成恒定等，G3-CNP或Gal-G2-α-CNP更符合这一要求。Gal-G2-CNP的结构式如下：↑所示为淀粉酶作用部位，而α-葡萄糖苷酶在此部位无水解作用。
4.2 α-葡萄糖苷酶能水解G≤3的麦芽寡糖，但非还原性末端用半乳糖代替后则不能水解，即内源性葡萄糖苷酶对Gal-G2-α-CNP无水解作用。本文实验在试剂中加入α-葡萄糖苷酶对结果无影响，证明可以避免内源性葡萄糖苷酶的干扰。由于血清中淀粉酶存在起源于胰腺P和唾液腺S的两种同工酶，它们对同一底物Km不同。曾对一唾液样品测定Km，测得Km＝1.44，明显高于急性胰腺炎血清标本。说明在该系统下测定S型淀粉酶时，底物浓度不足，Emily［2］认为加入154 mmol/L的NaN3对两种同工酶具有相同的激活作用，但NaN3可能对α-淀粉酶有异构作用，故本文建议不加入NaN3。考虑价格因素也不增加底物浓度，这样更能反映淀粉酶对急性胰腺炎的诊断价值。
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