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大鼠胚胎小脑提取液对培养脊髓神经细胞的作用 |
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)作相应稀释，得到不同蛋白浓度(0.05～0.60mg/ml)的CE。
1.2 细胞培养
取出E18脊髓，经胰酶消化得到脊髓细胞悬液，稀释到1×106/ml。将细胞悬液以5×104/孔的密度接种于96孔板。实验组每孔加入50 μl不同胎龄不同浓度的CE，对照组每孔加入50μl PBS (pH7.0)，每孔总容量为100μl。置培养箱内孵育24h。各组每次8孔，重复2～3批次。
1.3 快速微量自动比色(MTT)分析
终止培养前4h，96孔板每孔加10μl四唑盐衍生物MTT溶液(1.5mg/ml 1640)，继续培养4h后每孔加入100μl 0.08mol/L HCl—异丙醇溶液终止反应。用吸管反复抽吸使蓝色产物充分溶解，将培养板置于微板读数器内，采用实验波长570nm，参考波长630nm测定每孔样品的光密度(OD)值。四唑盐衍生物MTT可被活跃的细胞摄取，并在细胞质线粒体脱氢酶的作用下转变为蓝色产物formazan，在一定波长下比色得到OD值。活跃细胞越多，蓝色产物越多，则OD值越高，说明作用性越强。
1.4 统计分析
对所得数据进行Student s t检验，α=0.05。
2 结果
终止培养后测得各孔OD值，反映各胎龄不同浓度CE对培养24h E18脊髓神经细胞的作用，见表1、2，图1、2。
表1 E14及E16 CE对培养24h E18脊髓神经细胞的作用(n=8，±s)
OD值 对照组 实验组CE蛋白浓度(mg/ml)
0.05 0.10 0.15 0.20 0.25
E14 OD值 0.002
±0.001 0.038
±0.009 0.120
±0.020 0.132
±0.014 0.174
±0.019 0.155
±0.012
P ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001
E16 OD值 0.004
±0.002 0.047
±0.005 0.072
±0.017 0.099
±0.023 0.146
±0.020 0.213
±0.015
P ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001
图1 E14及E16 CE对培养E18脊髓神经细胞的作用
表2 E18及E20 CE对培养24 h E18脊髓神经细胞的作用(n=8，±s)
OD值 对照组 实验组CE蛋白浓度(mg/ml)
0.40 0.45 0.50 0.55 0.60
E18 OD值 0.010
±0.001 0.141
±0.025 0.056
±0.004 0.041
±0.005 0.031
±0.002 0.020
±0.001
P ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001
E20 OD值 0.006
±0.001 0.014
±0.001 0.010
±0.002 0.016
±0.002 0.008
±0.001 0.010
±0.004
P ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＞0.05 ＜0.02
表1和图1显示了0.05～0.25mg/ml蛋白浓度的E14与E16 CE对培养脊髓神经细胞的作用。可见各实验组与对照组有极显著性差异(P＜0.001)，E14组最适浓度为0.20mg/ml。
表2和图2显示了0.40～0.45mg/ml蛋白浓度的E18与E20 CE上一页 [1] [2] [3] 下一页
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