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哮喘病人B细胞体外产生IgE过程中幼稚性T细胞的影响作用 |
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1.5岁。
1.2 外周血单个核细胞(PBMC)的分离 取静脉血5 ml，肝素抗凝，用淋巴细胞分离液（上海试剂二厂）分离出PBMC，备用。
1.3 T、B细胞的分离 采用尼龙毛柱法，见文献［3］。实验过程如下：PBMC悬液离心后调成1 ml细胞悬液，加入直径3 mm，长100 mm的尼龙毛柱中，37℃CO2培养箱中放置1 h后，用Hank′s液轻轻冲洗尼龙毛柱，自然流出部分为T细胞，经挤压后流出部分为B细胞。
1.4 CD4+CD45RA+T细胞亚群的分离 将分离好的T细胞调成1 ml细胞悬液置于24孔培养板中，加入抗CD8单抗（北京医科大学免疫室），37℃反应40 min，再加入兔血清（我室制备），37℃反应1 h，洗涤细胞，调成1 ml细胞悬液(CD4+T细胞)分别加入抗CD45RO+单抗（美国PharMingen公司）和兔血清，各反应40 min和1 h，洗涤细胞，调成细胞悬液至1×106 ml-1，备用。
1.5 细胞培养 将具有活性的CD4+CD45RA+T细胞与B细胞(5×105/孔)在IMD培养基中培养9 d，刺激组加入PWM(美国Sigma公司)10 μg/ml，9 d后收取上清液，贮存于-30℃冰箱待测。
1.6 IgE检测 用抗人IgE单抗试剂盒（北京协和医科大学免疫室），方法参照文献［4］，用DG3022酶标仪490 nm测定A值（旧制为OD值）。
2 结果
2.1 哮喘病人CD4+CD45RA+T细胞对B细胞产生IgE的影响 见表1，病人B细胞与自体CD4+CD45RA+T细胞共同培养后，IgE产生量经统计学处理明显高于对照。
2.2 PWM刺激后CD4+CD45RA+T细胞对B细胞产生IgE的影响 为了观察CD4+CD45RA+T细胞活化后对B细胞产生IgE的影响，本实验用PWM作为刺激原,体外对CD4+CD45RA+T细胞进行刺激，然后观察对自体B细胞产生IgE的影响。结果显示：病人B细胞与自体CD4+CD45RA+T细胞共同培养，IgE产生量与健康对照比较经统计学处理无明显差别（表1）。
2.3 PWM刺激前后CD4+CD45RA+T细胞对B细胞产生IgE的作用 如表1所示，哮喘病人自然状态CD4+CD45RA+T细胞对B细胞产生IgE的作用明显高于活化后CD4+CD45RA+T细胞对B细胞产生IgE的影响；而正常人CD4+CD45RA+T细胞体外活化前后对自体B细胞产生IgE的影响无明显差别。
表1 哮喘病人及正常人CD4+CD45RA+T细胞活化前后对自体B细胞产生IgE影响作用
Tab.1 Effects of activated and non-activated CD4+CD45RA+T cells on IgE production by B cells in asthma patients and health donors
Level of IgE in the supernatant(±s, a value old unit was OD value) t p
Primitive CD4+CD45RA+T cells PWM-stimulated CD4+CD45RA+T cells
Patient group 0.444±0.154(n=20) 0.313±0.128(n=24) 1.9081) ＜0.05
Normal group 0.293±0.211(n=25) 0.329±0.228(n=24) 0.5742) ＞0.05
t 2.6333) 0.3074)
p ＜0.01 ＞0.05
Note:1)compared with primitive and PWM-stimulated CD4+CD45RA+T cells in patient group; 2)compared with primitive and PWM-stimulated CD4+CD45RA+T cells in normal group; 3)compared with patient group and normal group of PWM-stimulated CD4+CD45RA+T cells; 4)compared with patient group and nor上一页 [1] [2] [3] 下一页
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