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血管内皮生长因子的免疫学测定法 |
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王贵齐 董志伟 王耐勤 刘彤 徐光炜
摘 要 目的：检测肿瘤细胞条件培养液中VEGF的表达量。方法：在表达及分离纯化VEGF的基础上，成功地制备了VEGF抗体，以夹心法测定VEGF。结果：VEGF测定范围为0.02～200.00 ng/ml，灵敏度可达0.02 ng/ml，批内及批间变异均小于10%，回收率平均为102.4%。其中人胃癌细胞MGC803、BGC823、乳癌MCF-7及肝癌BEL-7402分泌上清中VEGF的含量分别为6.50 、0.45 、0.90 及1.45 ng/ml。结论：不同的肿瘤细胞系其VEGF的分泌量是不同的，应用此方法可以检测肿瘤病人血清中的VEGF。
关键词 血管内皮生长因子 肿瘤 放射免疫分析 细胞上清
中国图书分类号 Q58
Radioimmunoassay of vascular endothelial growth factor
WANG Gui-Qi， DONG Zhi-Wei,WANG Nai-Qin et al.Cancer Institute,Chinese Academy of Medical Science,Peking Union Medical College,Beijing 100021.Clinical Oncology College ,Beijing Institute for Cancer Research,Beijing Medical University,Beijing 100034
Abstract Objective: To detect expression level of VEGF is important for determining biological behaviour of tumor cells. Methods: Based on isolation, purification and expression of VEGF,successfully prepared anti-VEGF antibody and developed a sandwich radioimmunoassay for VEGF. Results: Detectable range of VEGF is between 0.02 and 200.00 ng/ml.The sensitivty or minimal detectable concerntration dose was difference of sample in the same group and among groups were all less than 10 percent. By the assay it is indicated that all four kinds of tumor cell lines secreted VEGF, MGC803, BGC823, MCF-7 and BEL-7402 separeately secreted 6.50,0.45, 0.90 ，1.45 ng/ml. Conclusion: VEGF can be detected in the serum of tumor patient with this assay.
Key words Vascular endothelial growth factor Tumor Radioimmunoassay Cell conditioned medium
血管内皮生长因子(VEGF)是重要的血管形成因子,与诸多生理及病理过程有关［1］,已知某些肿瘤细胞可分泌VEGF,后者与血管内皮细胞上的受体相结合,可诱导肿瘤血管形成,维持肿瘤的继续生长［2-4］。若干研究报道已指出,肿瘤患者的预后与肿瘤组织的血管密度明显相关［5-6］,因此测定某些肿瘤组织细胞分泌VEGF的能力是判定该肿瘤组织细胞的生物学指征之一。本文在表达及纯化人重组VEGF的基础上,制备了相应的抗体,并建立了放射免疫测定方法检测VEGF。
1 材料与方法
1.1 动物、细胞及试剂 新西兰白兔购自北京医科大学第一附属医院动物中心。MGC803、BGC823、MCF-7及BEL-7402分别为本所冻存的人胃癌、乳癌及肝癌细胞系,NIH3T3为小鼠成纤维细胞购自美国的ATCC。溴化氰活化的SepharoseCL-4B购自Pharmacia公司,牛血清白蛋白([1] [2] [3] 下一页
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