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琼脂集落形成实验检测造血生长因子集落刺激活性方法的改进 |
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孙 凯 金伯泉 张新海 冯 琦 朱华峰
摘 要 目的：改进经典的集落形成实验，使造血生长因子集落刺激活性的检测方法更加简便易行。方法：在24孔板中培养，采用琼脂半固体培养，根据培养体系中细胞因子的不同适合于多种造血因子集落刺激活性的检测。固定制片后适于多种染色并可长期保存。结果：经实验及应用证实本文介绍的方法能准确地反映造血生长因子的集落刺激活性，方法简便易行。结论：在研究造血及造血生长因子生物学活性时，经典的集落形成实验由于实验方法复杂而受到限制，本法使造血因子集落刺激活性的检测更加方便。
关键词 造血生长因子 集落形成实验 方法
中国图书分类号 R577.1
Improved colony forming experiments: an easily method in detection of hematopoietic factors
SUN Kai, JIN Bo-Quan, ZHANG Xin-Hai et al.
Department of Hepatobiliary, Xijing Hospital, The Fourth Military Medical University, Xi an 710032
Abstract Objective: In order to improve the traditional colony forming experiment and made it more convenient for testing of hematopoietic factor. Methods: The improved colony forming experiment was performed in 24 well culture plate by semi-solid agar culture system. And it could be used in testing of different hematopoietic factor colony-stimulating activity. Results: This method was proved to be available, easily and useful by different expreiment and application in our laboratory. Conclusion: Method introduced in this paper made it easier to test colony-forming ablility compared with traditional method.
Key words Hematopoietic factor Colony forming experiment Method
造血生长因子是一类主要作用于造血系统的细胞因子的总称。造血细胞的存活、增殖及分化离不开造血微环境中的造血生长因子。因此，在研究造血过程时，对造血生长因子的检测是必不可少的。集落形成实验同ELISA及细胞增殖实验相比较，不但能反映细胞因子水平，还能反应不同生长因子对集落形成类别的影响。我们经过摸索，使经典琼脂集落形成实验方法更加简便易行［1，2］。
1 材料与方法
1.1 材料 RPMI 1640培养液、淋巴细胞分离液、1.2%(W/V)琼脂、胎牛血清(FCS)、3%戊二醛固定液、Hank′s液、瑞氏-吉姆萨染液等。实验动物为8～12周龄Balb/c小鼠。
1.2 骨髓单个核细胞的制备 Balb/c小鼠，拉颈处死，无菌取股骨，剪去股骨两端，用4号针头，吸5 ml RPMI 1640洗液反复冲洗骨髓腔。收集细胞悬液用4号针头过滤以制备单细胞悬液。而后用RPMI 1640洗涤1遍，2 000 r/min离心10 min。细胞重悬于4 ml RPMI 1640中，沿管壁缓慢加入装有4 ml淋巴细胞分离液的10 ml离心管中，2 000 r/min离心15 min。用弯头吸管小心吸取界面处富含单个核细胞层，用RPMI 1640 洗液再洗涤1遍，悬于20%FCS RPMI 1640培养基中置塑料培养瓶中，在37℃、5%CO2孵箱中培养2 h，回收悬浮单个核细胞备用。
1.3 软琼脂集落形成实验 1.2%琼脂加热溶化，置46℃水浴中备用。计数已制备的骨髓单个核细胞，悬于40℃预热的40%FCS RPMI [1] [2] 下一页
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