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人胎盘绒毛上皮滋养层运动神经诱向因子1及其受体的发育变化与计量研究 |
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遆新宇 黄威权
(第四军医大学组织学与胚胎学教研室；西安 710032)
摘 要 为了解运动神经诱向因子1(MNTF1)及其受体在人胎盘发育过程中可能的功
能意义，用MNTF1单克隆抗体及抗独特型单克隆抗体在不同发育阶段人胎盘绒毛石蜡
切片上进行免疫组织化学反应，并结合图像分析技术观察了MNTF1及其受体在不同发
育阶段人胎盘绒毛上的变化。结果显示，在胎盘绒毛的发育过程中，MNTF1及其受体
的相对含量呈周龄性变化，妊娠早期(孕6～9周)，随周龄的增加而增加，于9周时达到
峰值，此后于妊娠中期及妊娠晚期则随周龄的增加而降低。以上结果提示：(1)MNTF1
对绒毛滋养层细胞hCG的合成和分泌可能有促进作用，而且此作用是通过其受体介导
而实现的；(2)MNTF1对胎儿的生长发育可能也有一定作用。
关键词 运动神经诱向因子1 运动神经诱向因子1受体 免疫组织化学 人胎盘绒毛
运动神经诱向因子1是从运动神经元的靶组织骨骼肌分离出来的分子量为35kD的
蛋白质[1]。我们先前的研究已经证实人早期胎盘绒毛滋养层细胞既能产生MNTF1，又
有其受体[2]，表明人胎盘产生的MNTF1可能通过旁分泌或自分泌的途径对胎盘滋养层
细胞起调控作用。但在胎盘绒毛的发育过程中，MNTF1具有怎样的变化规律值得探讨。
本研究用免疫组织化学反应结合图像分析技术，观察了人不同发育阶段胎盘绒毛上
MNTF1及其受体的分布及相对含量的变化规律。
材料与方法
1.试剂
小鼠抗大鼠MNTF1单克隆抗体及MNTF1抗独特型单克隆抗体为香港大学解剖学系
周明华博士惠赠，ABC 药盒为Vector公司产品。
2.组织材料
第6、7、8、9、10、16、24、40周人胎盘绒毛各5例，由第四军医大学唐都医院妇
产科提供。取得新鲜的胎盘绒毛，立即用4℃生理盐水洗去血液，剪成小块，用4%多
聚甲醛固定，以熔点50～52℃的石蜡将各组标本分别包埋在同一蜡块内，制成2μm 的
连续切片，将各周龄组的胎盘切片贴在同一载玻片上，然后进行免疫组织化学反应。
3.免疫组织化学反应程序
石蜡切片经脱蜡水化后入PBS(pH7.4)，经甲醇-H2O2孵育20min，除去内源性过氧化
物酶。按免疫组织化学 ABC法，进行免疫组织化学反应。MNTF1单克隆抗体及MNTF1
抗独特型单克隆抗体的稀释度分别为1∶100，在4℃冰箱内孵育时间均为24h。生物素标
记的马抗小鼠IgG抗体的稀释度为1∶200，ABC复合物的稀释度为1∶100，在室温下孵
育时间分别为1h和30min，DAB-H2O2显色10～30min。用正常鼠血清代替第一抗体孵育
作为对照。
4.MNTF1及其受体免疫反应产物的定量分析
用Q-500图像分析系统(美国Leica公司)对不同发育阶段胎盘绒毛的MNTF1及其受体
免疫反应产物的相对含量进行测定，在光镜下(×100)每例随机取样测5个绒毛断面，10
个单位面积，每组共测50个单位面积，计算出每个单位面积的MNTF1及其受体免疫反
应产物的相对含量，用组间t检验方法作统计学处理。
结 果
1.不同发育阶段人胎盘绒毛上皮中MNTF1及其受体的变化
呈免疫反应性的细胞为深棕色，背底呈淡黄色或无色，对比鲜明，易于辨认。对
照试验为阴性。绒毛的细胞滋养层、合体滋养层及基质细胞均呈MNTF1及其受体免疫
反应性，MNTF1及其受体免疫反应产物分布于胞质中。在妊娠早期(孕6周～9周)，滋
养层细胞MNTF1及其受体的免疫染色随周龄的增加而逐渐增强，孕6周时两层滋养层
细胞已出现阳性反应，强度较弱(图1，2)，第7，8周逐渐增强，以第9周变化最为显著，
可见绒毛上皮两层滋养层细胞均呈强阳性反应，阳性物质充满胞质(图3，4)。在妊娠中
期及妊娠晚期随周龄的增加MNTF1及其受体的免疫染色逐渐降低，第40周绒毛上皮滋
养层细胞仅呈弱阳性反应(图5，6)。
2.不同发育阶段人胎盘绒[1] [2] 下一页
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