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膀胱肿瘤中p53 p21 C |
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3～5］。
肿瘤的发生与机体免疫功能有关，尤其是细胞免疫功能有关。本文在对癌基因研究的同时，对膀胱癌患者术前、术后外周血T淋巴细胞亚群、Et、Ea进行了测定。
1 材料与方法
1.1 病例选择 选择膀胱移行细胞癌：男性30例，女性10例；年龄15～80岁，平均55岁。另取10例正常膀胱组织标本作对照组。
1.2 标本处理 所有标本经石蜡包埋，作4 μm连续切片，1份重新作HE染色以核实诊断；另3份作p53、p21、C-erbB-2染色。
1.3 免疫组化LSAB法
1.3.1 方法 ①用1∶50丙酮浸泡载玻片，以防脱片。②用3%H2O2处理切片以灭活内源性酶。③用0.01 mol/L柠檬酸盐处理p53、p21切片，经加热、冷却后进行下一步。④p53、p21切片滴加抗原修复液；C-erbB-2滴加复合消化液。⑤加封闭液。⑥分别向3张切片加小鼠抗p53、p21、C-erbB-2蛋白抗体。⑦加山羊抗小鼠IgG。⑧加APA-兔抗山羊IgG。⑨DAB染色。⑩苏木素轻度复染，直到切片呈蓝色。
1.3.2 结果判定标准 p53蛋白产物显色特点：光镜下见膀胱癌细胞核染成棕黄色，部分胞浆亦被染色，阳性细胞在癌组织内呈局灶性分布。p21蛋白产物显色特点：光镜下见显色多位于胞浆内，为棕黄色，胞膜亦有着色，显色过强时呈棕褐色，可见细小及粗大颗粒。C-erbB-2蛋白产物显色特点：光镜下见显色多位于胞浆内，为棕黄色，大多数为片状分布，少数为局灶性及弥漫性分布。
1.4 T淋巴细胞亚群的检测 采用间接免疫荧光法(IFA)，用OKT11、OKT4和OKT8抗体对病人组和对照组外周血淋巴细胞进行染色。OKT11识别全部成熟T淋巴细胞和NK细胞。OKT4识别辅助性T细胞亚群，OKT8识别抑制性T淋巴细胞亚群。
1.5 Et花环及Ea花环检测 见参考文献［6］。
2 结果
2.1 p53、p21、C-erbB-2表达与膀胱癌病理分级 从表1可以看出p53、p21、C-erbB-2阳性表达率均随病理分级的上升而明显增加；Ⅰ级与Ⅱ级、Ⅲ级；Ⅱ级与Ⅲ级之间有显著性差异(P＜0.05)。并且p53、p21、C-erbB-2阳性程度也随病理分级上升而增强，经χ2检验相关分析，均为P＜0.05。
2.2 p53、p21、C-erbB-2阳性表达与膀胱癌复发的关系 本实验检测40例标本中(见表2)除行膀胱全切3例外，复发21例，未复发16例。从结果中可以看出阳性表达的复发率明显高于阴性表达复发率。
2.3 p53、p21、C-erbB-2表达与膀胱癌预后 本实验组死于该肿瘤17例。p53阳性者死亡率为71.4%(15/21)，而阴性者死亡率为31.5%(6/19)；p21阳性者死亡率为77.2%(17/22)，阴性者死亡率为31.8%(7/22)，见表3。
2.4 外周血T淋巴细胞亚群、OKT4/OKT8比值及Et、Ea花环 从表4中可以看出，随着肿瘤分级的升高其OKT4、OKT11、OKT4/OKT8、Et、Ea数值逐渐下降，而OKT8值则逐渐升高。
表1 p53、p21、C-erbB-2表达与病理分级的关系
Tab.1 Expression of p53，p21，C-erbB-2 genes and pathological grade
Pathological
grade p53
p21
C-erbB-2
＋ Total(%) -Total(%) + Total(%) -Total(%) ＋ Total(%) -Total(%)
Ⅰgrade 2 1 0 3(30.0) 7(70.0) 2 2 0 4(40.0) 6(60.0) 0 2 1 3(30.0) 7(70.0)
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