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乙型肝炎后肝硬化病人的辅助 |
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郭树彬 张曼娜 宋国培
乙型肝炎后肝硬化病人体内长期有乙型肝炎病毒存在，肝功能损害反复出现，病情不断进展，其机理被认为是机体对病毒感染的免疫应答所致。为了研究乙型肝炎后肝硬化病人T淋巴细胞亚群的变化与机体免疫紊乱的关系，我们采用单抗致敏花环-PAP双染色法及间接免疫荧光法对乙型肝炎后肝硬化病人外周血中的不同T细胞亚群进行检测，从亚群数目变化的角度对肝功能的损害及细胞、体液免疫的异常进行了解释，以指导临床治疗。
中国图书分类号 R575.1 R575.2
1 对象与方法
1.1 检测对象 所有病人组均经临床明确诊断为乙型肝炎后肝硬化；对照组为健康成人，均无慢性疾病和免疫病史。
1.2 检测方法
1.2.1 淋巴细胞分离及计数 常规采外周血进行。
1.2.2 间接免疫荧光法测定T淋巴细胞亚群 CD3、CD1、CD8及CD25抗CD3、CD4、CD8、CD23鼠单抗由德国MPG协会风湿/免疫研究所提供，FITC标记的兔抗鼠IgG购自武汉生物制品研究所。将淋巴细胞悬液与鼠单抗混匀，4℃反应1 h，洗涤3次，加FITC标记的兔抗鼠IgG，4℃反应1 h，洗涤3次，重悬至原体积，取样滴于玻片镜检。用普通光计数视野中淋巴细胞，后用紫外光计数同一视野中有荧光的细胞数，计算荧光阳性细胞百分率。
1.2.3 PAP双染色法检测T淋巴细胞亚群 鼠PAP及羊抗鼠IgG购自中国军事医学科学院。取淋巴细胞悬液与致敏CD4红细胞混匀，涂片，固定，除酶，封闭，洗片，加鼠单抗，室温1 h，加羊抗鼠IgG，室温反应1 h，DAB遮光染色6～12 min，洗片，甲基绿染核1 min以上，梯度酒精脱水，二甲苯透明后滴加拿大树胶，盖片封固。镜下计数阳性花环，膜着色为橙红色的细胞为CD4+CD45 RO+和CD4+CD45 RA+T细胞，计算相对百分率和绝对数。
1.3 统计学方法 采用显著性t检验。
2 结果
乙型肝炎后肝硬化病人T淋巴细胞亚群变化见表1、2。
表1 乙型肝炎后肝硬化病人外周血T淋巴细胞亚群变化(±s)
Tab.1 Changes of T lymphocyte subpopulations in peripheral blood from patients with HBsAg-positive hepatocirrhosis(±s)
T lymphocyte
subpopulation Patients
group(%) Control(%) P
CD3+ 61.0±4.58 55.0±8.50 ＜0.01
CD4+ 40.1±7.50 43.8±9.00 ＜0.05
CD8+ 35.5±6.20 32.0±7.10 ＜0.05
CD25+ 3.8±2.60 5.8±2.20 ＜0.01
CD4+CD45 RA+ 21.2±5.60 22.4±4.20 ＞0.05
CD4+CD45 RO+ 35.6±7.20 29.0±6.10 ＜0.01
表2 乙型肝炎后肝硬化病人外周血淋巴细胞绝对数的变化
Tab.2 Changes of absolute number of T lymphocyte in peripheral blood from patients with HBsAg-positive hepatocirrhosis
Cell type Patients group Control P
(cells/μl) (cells/μl)
Total T cell 1 250±178 1 810±125 0.001
CD4+CD45 RA+T cell 320±78 510±60 0.05
CD4+CD45 RO+T cell 468±76 467±72 0.05
3 讨论
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