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大鼠下丘脑内神经激肽B受体阳性神经元向孤束核的直接投射 |
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端粘接有微玻管(尖端内径15～20μm)的微量注射器向中尾段NTS内缓慢注入4% FG(双蒸水配制)0.03～0.04μl，留针10min，动物存活6～7d后，在戊巴比妥钠深度麻醉下，同上灌注固定、浸糖、切片。注射区切片裱片后自然干燥，首先用荧光显微镜在360nm的紫外光激发下，观察注射区范围。部分切片再经Nissl染色，进一步确定注射区的位置。下丘脑切片收集于0.01mol/L PB配制(pH 7.2)的生理盐水(PBS)内。然后进行荧光免疫组织化学染色，其过程除一抗浓度为1mg/L、ABC复合物用得克萨斯红(Texas Red;TR)标记的卵白素(Vector;1∶1 000)代替以外，其他免疫染色过程同上。切片用含50%甘油的0.01mol/L PBS(pH 7.2)封片后，Olympus落射荧光显微镜(BX-60)观察并摄片。在波长360nm的紫外激光发下观察下丘脑逆标细胞内FG发出的亮黄色荧光，在波长530～580nm黄色激发光下观察NKR阳性细胞内的TR发出的红色荧光。计数3种标记细胞(FG单标细胞、TR单标细胞及FG/TR双标细胞)，并记录它们在下丘脑内的定位分布。
对照实验在省略一抗和用正常兔血清替代一抗的条件下进行，结果为阴性。
结 果
1.NKR阳性细胞在下丘脑内分布
下丘脑内分布有大量NKR阳性神经元，且多数阳性神经元染色较深，突起较长，形似Golgi染色外观，这些阳性神经元密集分布于室旁核、视上核、下丘脑背侧区(图3)、穹窿周核(图4)、下丘脑外侧区中段和乳头体内侧核的内侧亚核；少量NKR阳性细胞散在分布于室周核、下丘脑前区、下丘脑后区、乳头体外侧核和下丘脑外侧区的前段和后段。但在下丘脑的视交叉上核、弓状核、腹内和背内侧核、结节乳头体核和乳头体内侧核外侧亚核内未见有NKR阳悸细胞出现。
2.FG标记细胞在下丘脑内的分布
12只大鼠的FG注射区的中心位于中尾段NTS的连合亚核和内侧亚核内。完全局限于上述两亚核内的有2例(R2，R10：图1，2)，向外弥散到外侧亚核的有两例(R3，R9)，向腹侧波及舌下神经核的有4例(R1，R8，R11，R17)，波及舌下神经核及其临近延髓网状结构的有4例(R4，R7，R15，R16)。各例在下丘脑内的FG标记细胞定位分布上基本一致，但注射区较大的实验标记细胞的数量略多于注射区较小者。标记细胞在下丘脑内的分布以同侧为主，对侧少量散在分布，但两侧记细胞出现的位置相同。FG标记细胞分布在下丘脑中后部(冠矢点后1.80～4.16mm，根据Paxions和Watson图谱)，主要分布于下丘脑外侧区的背侧部和腹外侧部、穹窿周区、下丘脑背侧区和室旁核、弓状核内有散在分布。此外，少量的标记细胞出现于未定带和未定带下核内。FG标记细胞以小型细胞为主，多呈圆形或椭圆，直接为10～15μm；少量为中型细胞，直径为20～25μm。
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