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高脂血症大鼠肠系膜上动脉NPY免疫反应性神经纤维的变化 |
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郭国庆* 魏 洪 邝国璧
(中山医科大学解剖学教研室，广州510089；
*暨南大学医学院解剖学教研室，广州)
摘 要 为探讨神经肽Y与动脉粥样硬化的关系，用ABC免疫组织化学及体视学方法观察高脂血症大鼠肠系膜上动脉神经肽Y免疫反应性神经纤维的变化。(1)定性观察：对照组各时期神经肽Y免疫反应性神经纤维呈网状攀附于血管周围，分布均匀，并见串珠状膨体；高脂组纤维呈密集网状分布，在纤维网孔中出现大量较纤细的新增生纤维，其排列较紊乱，膨体清晰可见，这种变化见于各期实验组。(2)定量结果：对照组各时期纤维密度无明显改变；高脂组纤维密度逐渐增多，30d、90d与7d比较差异显著(P<0.01)，且分别较对照组增多(P<0.01)。结果提示，血脂升高可促使肠系膜上动脉壁神经肽Y免疫反应性神经纤维增生，这种变化可能与动脉粥样硬化的发生、发展有关。
关键词 高脂血症 肠系膜上动脉 神经肽Y 免疫组织化学 大鼠
神经肽(neuropeptide Y, NPY)是交感神经末梢分泌的神经递质之一，不仅调节心血管系统的正常生理功能，而且与心血管系统疾病有密切关系。交感神经在动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)发生，发展中的作用一直存有争议，故许多有关AS病因学的文献很少提及交感神经系统的作用［1］。近年来，学者们［2～5］发现NPY能促进平滑肌细胞增殖，而且高脂血症时血管对NPY的收缩反应明显增强，且随年龄而递增。但目前尚缺乏有关高脂血症时NPY能神经纤维变化的形态学资料。鉴于此，本实验对雄性SD大鼠进行高脂血症造型，用ABC免疫组织化学方法观察肠系膜上动脉NPY免疫反应性神经纤维，并进行动态定量分析，初步探讨NPY与AS的关系。
材料和方法
1.实验动物
雄性SD大鼠(中山医科大学实验动物中心提供)48只，随机分2组：(1)高脂组：高脂饮食，饲料配方［6］：胆固醇2%，猪油10%，白糖5%，牛胆盐0.5%，他巴唑0.2%，基础饲料81.3%，合计100%；20g/d/只。(2)对照组：普通饮食；分别于7d、30d、90d 3时期处死动物进行观察；各时期动物均为8只。
2.试剂
胆固醇(进口分装，Holland产品)，兔抗NPY血清(香港中文大学医学院姚大卫教授馈赠)，生物素标记羊抗兔IgG及ABC复合物(Vector产品)，DAB(Sigma产品)。
3.血脂测定
处死前禁食12h，经下腔静脉采用1～1.5ml；离心分离血清；分离抽提-乙酰丙酮显色法测甘油三酯，醋酐硫酸单一试剂直接显示法测总胆固醇［7］。
4.免疫组织化学染色
4%多聚甲醛灌(4℃)注固定1h，先快后慢；取肠系膜上动脉第一级分支；入相同固定液(4℃)5h；20%蔗糖(4℃)保存；O1ympus体视显微镜下去除血管外结缔组织，进行免疫组织化学染色，简要过程如下：(1)0.3%H2O2，室温，5min；(2)正常羊血清，室温，1h(不冲洗)；(3)1∶1 500兔抗NPY血清，4℃，湿盒，60h；(4)1∶200生物素化羊抗兔IgG抗体，4℃，湿盒，24h；(5)1∶100ABC复合物，4℃，湿盒，12h；(6)0.05%DAB/0.01%H2O2显色7min；以上各步骤前后均用0.01mol/L PBS漂洗3×10min；铺片，自然干燥，常规脱水、透明、封片。染色结果用Olympus BH-2显微镜观察并摄片。
本实验用0.01mol/L PBS或正常羊血清替代第一抗体作为阴性对照。
5.NPY免疫反应性神经纤维体视学分析方法
按Dhital等［8］的神经纤维定量程序，每条动脉(n=8)取近、中、远3段3个视野，于40×物镜和10×目镜(内装方格测微尺)下计数0.25mm长血管神经纤维与方格线的交叉点数，取3个值的平均数表示该血管NPY免疫反应性神经纤维的密度(交叉点数/0.25mm2)，用SPSS/PC统计软件进行组内及组间t检验。
结 果
1.血脂变化
对照组血总胆固醇为3.45±0.42mmol/L;高脂组7d即明显升高，达12.08±1.15mmol/L,30d、90d皆维持于此水平；各组动物血甘油三酯实验前后无明显变化，维持在3.15±0.[1] [2] 下一页
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