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血小板提取液NPY与NT在血液透析中的表达及意义 |
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析3次，每次4.0～5.0 h。选择30例健康献血员作为对照组。男17例，女13例，平均年龄为32.5±12.0岁。
1.2 方法
1.2.1 血小板提取液的制备 分别于HD前、后即刻抽取患者静脉血(对照组抽取空腹静脉血)3 ml，立即注入含有40 mmol/L的EDTA2Na 80 μl的试管中，轻轻摇匀，于4℃500 r/min离心30 min后，吸取所有血浆于另一硅化塑料试管中，4℃ 2 000 r/min离心30 min，将上清倾入另一试管中，作为不含血小板的血浆标本，沉淀即为血小板。以生理盐水洗涤沉淀一次，离心倾去上清，于沉淀中加入1 ml生理盐水，充分混匀后，在F800血球计数仪上行血小板计数。调整血小板数为1×109 L-1。将血浆与血小板混悬液置于-30℃以下待测。
1.2.2 样本NPY与NT测定 将血小板混悬液于-30℃～37℃反复冻融3～4次，镜下观察血小板形态大部分裂解、破碎，再以抽干机浓缩抽干后，取1 ml生理盐水复溶，待充分溶解后进行NPY与NT放射免疫测定。人工合成的NPY、NT与相应抗体均为Sigma公司产品(美国进口)。NPY碘标记物为美国Amersham公司产品，125I-NPY稀释后为14 000 cpm/min。125I-NT稀释后为18 000 cpm/min。本抗血清与7种常见多肽类化合物交叉反应小于1%。采用放射免疫非平衡法进行标准曲线及样品和复管检测。此方法两步温育，延长抗原、抗体温育时间，提高方法灵敏度。以上NPY与NT试剂均由解放军总医院东亚免疫技术研究所提供。测量仪器由中国核工业部北京核仪器厂提供的FT-630G微机多探头γ-计数仪。样本浓度按下式计算：
1.2.3 统计学处理 所有数据以(±s) 表示，均数之间比较采用t检验，以P＜0.05为显著性大小的标志。
2 结果
2.1 血小板提取液中NPY与NT水平 与30例正常人比较，HD前NPY水平明显降低，而NT明显增高，均有显著性差异(P＜0.01)。与HD前比较，HD后NPY明显增高，NT则明显降低，并具显著性差异(P＜0.05)，见表1。
表1 血小板提取液及血浆中NPY与NT在HD过程中的表达(±s)
Tab.1 Expressions of NPY and NT in the platelet extract and plasma during HD (±s)
Groups n Platelet (ng/109) Plasma (ng/L)
NPY P NT P NPY P NT P
Normal 30 58.18±21.29 25.38±13.63 144.06±33.83 70.66±24.72
Pre-HD 35 33.97±19.80 ＜0.01 40.47±23.99 ＜0.05 423.26±54.97 ＜0.01 133.83±92.23 ＜0.01
Post-HD 35 65.57±28.571) ＞0.05 15.76±13.22 ＜0.05 315.49±50.192) ＜0.01 205.06±134.09 ＜0.05
Note:1)compare with pre-HD, P＜0.01；2)compare with pre-HD, P＜0.01
2.2 血浆中NPY与NT水平 与对照组比较，HD前血浆NPY升高极为显著(t=23.36，P＜0.01)。NT水平亦明显升高(P＜0.01)。HD后血浆NPY明显降低，与HD前比较差异十分显著(P＜0.05)，NT则在HD后明显增高(P＜0.05)，见表1。
2.3 样本相关分析 见表2。
表2 血小板提取液和血浆中NPY与NT相关性
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