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血管紧张素 转换酶基因多态性与原发性高血压关系探讨 |
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7 kPa和舒张压≤12.0 kPa)的正常受试者178人，经询问家族史，其中父母均无高血压者116人(NT－，男77；女39)，年龄(54.2±11.7)岁。父母均有或其中之一有高血压者62人，(NT＋，男34；女28)，年龄(49.0±11.6)岁。
EHT患者组：经临床检查证实收缩压≥21.3 kPa或舒张压≥12.7 kPa或正在服用抗高血压药物的EHT患者(排除继发性高血压和合并糖尿病患者)159人。其中父母均无高血压的患者57人(EHT－，男39；女18)，年龄(58.1±10.5)岁。父母均有或其中之一有高血压的患者102人(EHT＋，男68；女34)，年龄(53.7±10.1)岁。
二、方法：
(1)DNA提取与纯化：血细胞通过SDS和蛋白酶K消化，再用酚去除蛋白，可提取基因组DNA片段［1］。
(2)ACE多态性PCR方法［2］：
引物：p1，5′－CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT－3′
p2，5′－GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT－3′
1X缓冲液(3.0 mmol/L MgCl2、50 mmol/L KCl、10 mmol/L Tris-HCl pH 8.4,0.1 g/L明胶)，0.5 mmol/L dNDPs,引物p1和p2各10 pmol，模板DNA约300 ng和1单位 Taq DNA聚合酶，反应总体积50 μL。在PCR仪上扩增(Perkin Elmer 480)，94℃变性1 min，58 ℃退火1 min，72 ℃ 延伸1 min，共30个循环。PCR产物在含溴乙锭的2%琼脂糖凝胶电泳。
三、组间频数比较采用χ2检验。
结 果
应用PCR检测ACE I／D基因多态性，由于ACE基因在第16内含子存在一个287bp的插入(Ⅰ)或失(D)的Alu重复序列。对每一样本ACE基因的PCR产物，经2%琼脂糖电泳后，可出现纯合子490bp插入型(Ⅱ)和190bp缺失型(DD)或490bp/190bp杂合型(ID)的3种类型之一。
1.NT和EHT 2组ACE基因型分布经χ2检验(分别为0.093；0.310，P＞0.05)均符合Hardy－Weinberg平衡。表明来自同一人群。
2.从表1所示，NT－和NT＋ACE基因型分布和等位基因的频率在两组之间无显著差异。两组合并后，按年龄(≤49岁，n＝86；50～59岁，n＝16；≥60岁，n＝76)分3组，ACE基因型频率分布3组之间无显著差异，等位基因的频率3组之间和≤49岁与≥60岁之间有显著差异(χ2＝5.592 P＜0.05)。ACE DD型基因有随年龄增加而降低趋势。
3.从表2所示，EHT－和EHT＋ ACE基因型分布和等位基因频率在两组之间无显著性差异。两组合并后，按年龄(≤49岁，n＝54；50～59岁，n＝29；≥60岁，n＝76)分3组，ACE基因型分布和等位基因的频率无显著差异。
表1 正常血压人群组中ACE基因型分布和等位基因频率
Tab 1 Genotype distribution and allelic frequency of angiotensin-converting enzyme in normotensive subjects
n Genotype Alleles
DD ID Ⅱ D I
NT－ 116 22(20%) 55(46%) 39(34%) 99(43%) 133(57%)
NT＋ 62 13(21%) 31(50%) 18(29%) 57(46%) 67(54%)
χ2 0.260 P＞0.05 0.194 P＞0.05
Total 178 35(20%) 86(48%) 57(32%) 156(44%) 200(56%)
≤49 y 86 21(24%) 45(52%) 20(23%) 87(51%) 85(49%)
49～59 16 3(19%) 6(37%) 7(44%) 12(38%) 20(62%)
≥60 y 76 11(14%) 35(46%) 30(39%) 57(38%) 上一页 [1] [2] [3] 下一页
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