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生长激素诱导心肌细胞外信号调节酶激活及其上游调控 |
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。然后用蛋白A Sepharos beads沉淀免疫复合物。收集的免疫复合物洗三次，再悬浮于激酶缓冲液(含25 mmol/L Tris-HCl pH 7.4,10 mmol/L MgCl2， 1mmol/L DTT, 40 mmol/L ATP, 7.4×104 Bq［γ-32P］ATP,2 mmol/L蛋白激酶抑制剂和0.5 mmol/L EGTA)。再与25 mmol/L MBP 25℃反应10 min,加入Laemmli缓冲液(0.002%溴酚蓝，pH 7.0的10 mmol/L磷酸盐缓冲液，10%甘油，0.4% SDS， 1% 2-巯基乙醇)终止反应。样本煮沸5 min，取上清电泳后，放射自显影观察磷酶化带。
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