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大鼠RAPD标记的观察 |
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碱基序列见表1。
表1 大鼠RAPD分析结果
引物(5 ～3 ) SD大鼠 Wistar大鼠
数 目 大 小 数 目 大 小
1. GGGGGGATTA 0 1.5
2.0～0.60.9
0.9～0.3
2.0～0.9
1.5～0.9
1.3～0.3 0 2.0～0.9
1.5～0.3
1.5
1.5
1.5～0.9
2.0
2. TCCGGGTTTG 0～1 2～3
3. CCGGCCTTAG 3～5 1～3
4. TTACCTGGGC 1 0
5. TTCCCCGGGC 2 1
6. TTGGCCGAGC 2～4 0～1
7. GGGGACGCGA 0 1～2
8. GTGCTCTAGA 0 0
9. GGGGGTTAGG 1～2 1
10. ATCGGGTCCG 3～4 0
表内数字代表RAPD标记数目及大小(kb)
1.4 RAPD条件和电泳检测
RAPD反应体积25ul, 含10mmol/L Tris.HCl, pH8.3, 50mmol/L KCl, 2mmol/L MgCl2, dNTPs 0.1mmol/L, 0.5μmol/L 引物, 50～100ng模板DNA, TaqDNA聚合酶1.5单位。反应程序为94℃变性30秒, 36℃复性1分钟, 72℃延伸2分钟, 计45个循环, 最后72℃保温10分钟。反应于PTC-100型PCR仪进行。扩增产物于1.4%琼脂糖凝胶电泳(2.5V/cm) 1小时, 溴化乙锭染色,紫外灯下观察, 记录清晰的DNA电泳区带。
2 结果与讨论
RAPD采用多种随机引物, 分析生物基因的多态性特征, 每一引物扩增的DNA 片段代表了基因组中一个或多个结合位点, 作为RAPD特征标记。实验采用的10种引物每条引物扩增DNA片段在0～5个之间, 大小是在0.3～2.0kb之间。 根据电泳检测分析各标本扩增结果, DNA片段的数目和大小组成了特征性RAPD电泳图谱。SD大鼠获较清晰的DNA条带约12～16条, Wistar大鼠约7～10条。各引物扩增DNA片段表现出明显的差异, 较特异的是引物4和10在SD大鼠, 引物7在Wistar大鼠的扩增片段, 表现为单态或多态性, 可能是SD及Wistar大鼠的较特异的RAPD标记。其它引物在二种大间比较具有DNA片段数目和大小的不同。引物1和8未见清晰的扩增条带(见表1, 图1)。 从这些结果可以看出, 利用RAPD标记作为鉴别二种大鼠的基因多态性的标记, 可以将大鼠在基因水平区别开。在利用大鼠进行其它实验中, 不慎将部分大鼠血标本混淆，即利用该方法分析比较，将大鼠的血标本区别, 重新认证。 因此, 为大鼠研究提供了一种有用的遗传标记。
图1 SD大鼠(a)及Wistar大鼠(b)RAPD分析结果
图中数字为引物号; M为Lamda DNA/EcoRI+HindⅢ。
作者单位：
李昕权
军事医学科学院附属医院, 北京 100039
李丰益
华西医科大学附属第二医院, 成都 610041
参考文献
[1] Williams J G K, Kubelik A R, Livak J et al. DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers. Nucleic Acids Res., 1990, 18: 6531～6535
[2] Welsh J, McClelland M. Fingerprinting genomes using PCR with arbitrary primers. Nucleic Acids Res., 1990, 24: 7213～7218
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