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肥厚型心肌病患者心肌mtDNA大片段缺失的探讨 |
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尹桂芝1) 张丽容1) 李殿富1) 张丽珊2)
摘 要 应用Long PCR及Primer Shift Long PCR 技术对3例肥厚型心肌病(HCM）患者和10例正常引产胎儿的13份心肌标本予以线粒体 DNA缺失检测，结果在1例HCM患者心肌线粒体DNA中发现约5.0kb缺失，而在正常引产胎儿的标本未见该缺失，提示HCM的发生可能与mtDNA缺失相关。
关键词 肥厚型心肌病, 线粒体DNA, 缺失
中图分类号 Q39
Analysis of mtDNA Deletion on Heart Muscles of
Hypertrophic Cardiomyopathy Patients
YIN Gui-Zhi ZHANG Li-Rong LI Dian-Fu ZHANG Li-Shan
(Nanjing Railway Medical College, Nanjing 210009)
Astract Using long PCR and primer shift long PCR techniques, we analyzed the mitochondrial DNA (mtDNA) isolated from the heart muscles of 3 hypertrophic cardiomyopathy (HCM) patients and 10 normal abortive fetuses. Almost 5.0kb deletion was found in the heart mtDNA of one HCM patient, while no deletion was detected in that of 10 fetuses. It is concluded that HCM may correlate with mtDNA deletion.
Key words Hypertrophic cardiomyopathy, Mitochondrial DNA, Deletion
线粒体是细胞氧化磷酸化（OXPHOS）产生能量的场所，OXPHOS所需的酶是由核DNA与mtDNA共同编码的，因此mtDNA突变（缺失、点突变）会直接影响到线粒体功能〔1〕。迄今已发现100多种疾病与线粒体功能障碍有关，在心脏方面主要表现为心肌病变〔2〕。1990年Ozawa等首先在原发性心肌病患者心肌mtDNA中发现缺失, 分析它是心肌病的致病因素之一〔3〕；1991年我们也在1例 HCM 患者心肌中发现 mtDNA 400bp缺失，认为它与HCM的发生密切相关〔4〕。本文应用Long PCR及Primer Shift Long PCR 技术扩增mtDNA（共16 569bp），在第2 695～16 445位碱基范围（约14kb）内分析3例HCM患者及10例正常引产胎儿心肌mtDNA缺失情况，发现 1 例患者存在约5.0kb缺失。
1 材料和方法
1.1 研究对象
符合临床诊断标准的肥厚型心肌病患者3例，取其心肌标本，另取10例正常引产胎儿心肌标本为对照。
1．2 试剂与方法
1．2．1 心肌组织DNA提取 采用常规酚、氯仿、异戊醇抽提法提取心肌组织DNA（内含mtDN
A），将抽提出的DNA溶于TE缓冲液，置于4℃冰箱保存备用。
1．2．2 PCR扩增 试剂购自美国PE公司XL PCR kit（内含rTthDNA聚合酶，3.3×buffer，dNTP ，Mg(OAc)2），引物由中国科学院上海细胞生物学研究所合成。
引物起止位置 序 列 扩增片段长度
L1 2 695～2 720 GAG CTC GCG GGC AAC ACA CAG CAA AC L1～H1
H1 16459～16436 GGC CTT CCG GAG CGA GAC TAG 13.7kb
L2 5606～5626 CAG TGC ATC GAT AAC ATA CAA L2～H2
H2 16445～16426 TTA AAA CTT CAG AGC GAG GA 10.8kb
大片段扩增：反应总体积50μl，dNTP1.0 mmol/L，引物各为0.5μmol/L, Mg2+ 1.5mmol/L, [1] [2] 下一页
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