|
细菌感受态细胞摄取和分泌DNA的相关性研究 |
| |
I. 含有质粒的枯草芽孢杆菌自然感受态缺陷突
变株的诱变和分离
谢志雄 陈向东 陈 琪 沈 萍
摘 要 以携带pUB110质粒的枯草芽孢杆菌BR151菌株为出发菌株，利用亚硝基胍作诱变剂，直接在LB平板上进行诱变。从2949个菌落中筛选出一个转化频率低于出发菌株2～3个数量级的突变株，并对其营养缺陷型、UV的敏感性及Km抗性和质粒进行了检测，确证其转化能力降低为自然感受态缺陷而非营养缺陷型的改变或重组缺陷所致。
关键词 枯草芽孢杆菌, 自然感受态缺陷突变株, 诱变, 筛选
中图分类号 Q933
Study of the Interrelations Between DNA Uptake and
Secreting of Competent Bacterial Cells
I. Mutagenesis and Isolation of Natural Competence-deficient Mutant
from Containing Plasmid Bacillus subtilis
XIE Zhi-Xiong CHEN Xiang-Dong CHEN Qi SHEN Ping
(College of Life Sciences, Wuhan University, Wuhan 430072)
Abstract Natural competence-deficient mutant of Bacillus subtilis BR151, which carries plasmid pUB110, was obtained by nitrosoguanidine mutagenesis on solid medium. From 2949 clones, a mutant, the transformation frequency of which is 102～103 times lower than that of the control, was obtained and tested for the changes of trophic type, resistance to Km, plasmid and sensitivity to UV. The results indicate the reduction of transformation frequency is due to competence-deficient mutation.
Key words Bacillus subtilis, Natural competence-deficient mutant, Mutagenesis, Screening
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）自然感受态的建立涉及到10多个基因的功能〔1〕，这些基因的有序表达，使其具有摄取外源DNA的能力，用以补充营养、修复DNA损伤以及获得抗逆性等新的遗传性状，从而适应不断变化的环境〔2, 3, 4〕。近年来的研究发现，处于感受态的细胞不仅具有摄取DNA的能力，而且在此状态下细胞也处于DNA分泌的高峰，且分泌的DNA具有遗传转化活性〔5, 6〕。但DNA摄取和分泌之间的关系等方面的研究目前还未见报道。这方面的研究有助于了解和揭示自然遗传转化中供体的功能，也将为分子生物学、生物进化等方面的研究提供新的思路，此外，在遗传工程微生物（GEMs）的构建和合理使用等方面也将具有理论与应用价值。
为了研究自然感受态的建立与DNA（包括染色体DNA和质粒DNA）分泌的关系，首先需获得自然感受态缺陷的突变株。因此，我们以一株含有质粒的枯草芽孢杆菌为出发菌株进行诱变，以期获得为进一步研究所需的自然感受态缺陷菌株。
1 材料与方法
1.1 菌株
B. subtilis携带pUB110质粒（Kmr）的菌株、B. subtilis BR151 (trpC2metB5 lys3amyKms）和B. subtilis 168菌株(ilvA1pyrD1trpC2 Kms)，均由中国典型培养物保藏中心(CCTCC)提供。
1.2 培养基
LB(/L)：蛋白胨 10g；酵母抽提物 5g；氯化钠 5g；pH7.2。
Spizizen基本培养基(/L[1] [2] 下一页
上一个医学论文： 大豆的基因组研究及其进展
下一个医学论文： ENU诱导带LacZ靶基因的 gt11 DNA突变分子机理的初步研究
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 基础医学论文 >> 正文