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我国首次发现的HIV |
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翁育伟 严延生 陈舸 邢辉 郑兆双 邵一鸣 戴立芳
摘要： ［目的］ 从分子生物学角度进一步证实我们发现的1例HIV感染者为国内首例HIV-2型病毒携带者。［方法］ 从Genebank查询已知的HIV-2核酸序列，通过序列比较以及酶切位点分析查找HIV-2基因组中保守区，应用套式PCR扩增出HIV-2基因组LTR-GAG区的～330 bp的核酸片段，并经限制性酶切位点和序列分析证实该扩增片段为HIV-2特异性片段。［结果］ 实验表明，扩增片段为HIV-2特异性片段，序列分析也表明感染者体内病毒为HIV-2。［结论］ 从遗传学上进一步支持该感染者为HIV-2携带者。
关键词： HIV-2型病毒； 聚合酶链式反应（PCR）； 序列分析
中图分类号： R 512.9103 文献标识码： A
文章编号：1007－2705（2000）02-0001-03
Molecular Evidence of the First Case of HIV-2 Infection in China
WENG Yuwei，YAN Yansheng，CHEN Ge，et al
(Fujian Institute of Epidemiology. Fuzhou 350001, China)
Abstract: ［Objective］ To further confirm the first case infected with HIV-2 in China. ［Methods］ DNA extracted from PBMC of the HIV-2 infection was amplified with the primers located at LTR-GAG region of HIV-2 genome. PCR product was analyzed by HaeIII digestion and sequencing. ［Results］ The length of the PCR product was 330bp and contained the specific segment of HIV-2 in the region. Sequence analysis also showed the virus being HIV-2. ［Conclusions］ The study supports fully our finding as described previously in china.
Key words: HIV-2; polymerase chain reaction (PCR); sequence analysis
目前，在我国流行的HIV的毒株主要是1型毒株，尚未见有单纯HIV-2感染的报道。1998年12月我们从血清学上证实一名从科特迪瓦回国的男子为HIV-2感染者［1］。本研究从该感染者周围血淋巴细胞中提取DNA，设计HIV-2特异的引物扩增HIV-2基因组LTR-GAG区的～330 bp的核酸片段，通过限制性酶切位点和序列分析，进一步从核酸分子水平上证实该感染者体内的HIV病毒的特征，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 试剂 基因组DNA提取试剂盒购自华舜公司，Taq DNA polymerase、PCR buffer、限制性内切酶等均为上海华美公司产品，PCR产物的纯化使用博大生物科技公司的DNA纯化试剂盒，荧光标记末端中止物循环测序试剂盒为PE公司产品。引物由中国科学院上海生物工程研究中心合成。
1.2 样品处理与核酸提取 HIV-1及HIV-2的实验样品为经抗HIV抗体确认阳性后的感染者的静脉血，用淋巴细胞分离液分离单核细胞，PBS洗涤两次后再用PBS重悬，-70℃低温保存备用。核酸提取方法按照说明书进行，提取的DNA置-20℃保存备用。
1.3 PCR及其产物的纯化 对14株HIV-2病毒基因组全序列的比较发现，该病毒的LTR～GAG区约330 bp核酸片段较其它区域更为保守，适合于进行PCR检测。据此，我们设计两对引物并采用套式PCR方法扩增该片段，引物序列见表1。其中1～2为外侧引物，3～4为内侧引物。由于我省已经发现有HIV-1 A、B、C、E等亚型病毒的存在［2］，故同时以H2O和上述各亚型HIV-1的前病毒DNA为模板作PCR以检验扩增的特异性，两次的反应程序一致，[1] [2] 下一页
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