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大鼠脑干面口部运动神经元与5

育3h,再入ABC复合物(1∶200,Vector)孵育1h,最后用DAB呈色。经上述反应的切片入1%锇酸后固定,梯度酒精脱水(饱和醋酸铀染色与70%酒精脱水同时进行,15min×2次),Epon812平板包埋,选择三叉神经运动核、面神经核和舌下神经核内有5-HT样、SP样、L-ENK样、GABA样或Gly样阳性终末及HRP逆标神经元的部位超薄切片、铅染、Philips-100电镜观察。将第6套切片行Nissl染色,以便对照观察结果。

结  果

  光镜观察时可见,将HRP注入咬肌和咬肌神经或二腹肌前腹后,HRP逆标运动神经元分别见于Vm的背外侧部或腹内侧部;将HRP注入口周围肌、二腹肌后腹或茎乳孔外的面神经干后,HRP逆标运动神经元分别见于Ⅶ的外侧部、内侧部或Ⅶ的各部;将HRP注入舌内肌、颏舌肌或茎突舌肌后,散在分布的HRP逆标运动神经元见于Ⅹ Ⅱ的各部,这些神经元的分布区互相重叠,没有相对集中区。HRP逆标运动神经元均为大、中型多极神经元。在Vm、Ⅶ和Ⅹ Ⅱ内,未见5-HT样、SP样、L-ENK样、GABA样和Gly样免疫组织化学染色阳性神经元胞体,但均可见密集的5-HT样、SP样、L-ENK样、GABA样和Gly样阳性终末,在脑干的脑神经核中,脑干运动核内的上述阳性终末的密度最高,这些阳性终末常呈蓝状包绕在HRP逆标运动神经元的周围,它们在Vm、Ⅶ和Ⅹ Ⅱ不同区域内的分布没有明显差异。
  电镜观察可见,HRP逆标运动神经元的胞浆和树突内的TMB反应产物为不规则针状结晶,常呈板层状排列,由于经DAB和镍的加强,结晶的边缘不清晰,部分反应产物呈散在分布的细颗粒状(图1~6)。5-HT样、SP样、L-ENK样、GABA样和Gly样免疫组织化学染色阳性产物位于轴突及其终末的突触小泡内,产物呈弥散性分布,为不定形状。由于这些神经活性物质的免疫组织化学染色阳性产物较密集,常无法判别阳性终末内突触小泡的形态(图1~6),但在一些染色较淡的阳性终末内,可见5-HT样、SP样(图2)和L-ENK样阳性终末主要含透明圆形小泡,个别SP样和L-ENK样阳性终末内还可见致密颗粒囊泡,GABA样和Gly样阳性终末内可见透明圆形小泡和扁平小泡。
  在Vm、Ⅶ和Ⅹ Ⅱ内,均可见5-HT样、SP样、L-ENK样、GABA样和Gly样阳性终末与支配不同面口部肌肉的HRP逆标运动神经元的胞体和树突形成轴-体突触和轴-树突触(图1~6)。5-HT样、SP样和L-ENK样阳性终末与HRP逆标运动神经元的胞体和树突形成非对称性的轴-体突触和轴-树突轴(图1~3)。在这些非对称性突触中,突触前、后膜的厚度分别约为5~7nm和15~20nm,突触间隙宽25~30nm。GABA样和Gly样阳性终末与HRP逆标运动神经元的胞体和树突形成对称性的轴-体突触和轴-树突触(图4~6),但轴-体突触的数量明显少于轴-树突触。在这些对称性突触中,突触前、后膜的厚度分别约为5~7nm和6~8nm,突触间隙宽18~20nm。此外,可见一些5-HT样、SP样、L-ENK样、GABA样和Gly样阳性终末与未标记运动神经元胞体和树突分别形成以非对称性为主或以对称性为主的轴-体突触和轴-树突触,免疫组织化学反应阳性终末与HRP逆标运动神经元的胞体和树突也形成以非对称性为主的轴-体突触和轴-树突触联系,阴性轴突终末主要含透明圆形小泡(图1,5)。

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