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三叉初级感觉神经元的选择性标记 植物凝集素法光镜 电镜研究 |
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庄志业 刘大庸 李云庆*
(第一军医大学解剖学教研室，广州 510515；第四军医大学解剖学教研室)
摘 要 为了探讨三叉初级传入路径中传导伤害性信息的小神经元在结构和功能上的差异，用植物凝集素(Bandeiraea simplicifolia isolectin-B4,BSI-B4)法在光镜、电镜水平观察了三叉初级传入路径中标记神经元的分布及形态特征。光镜结果表明：BSI-B4标记的初级传入终末只分布于三叉神经尾侧亚核的Ⅰ层和Ⅱ层，尤以Ⅱ层密集，标记终末光滑不呈串珠状。三叉神经节中的BSI-B4标记神经元为中小型神经元，其中以小神经元为主。电镜观察表明：BSI-B4只标记无髓纤维，不标记有髓纤维；BSI-B4标记的轴突终末与阴性树突形成非对称性的轴树突触，突触小泡多为圆形清亮小泡，偶见大致密核心囊泡。提示：传导伤害性信息的三叉初级感觉神经元中，BSI-B4标记的神经元和P物质(SP)能神经元在功能上有明显差异，而标记神经元和谷氨酸能神经元可能具有类似的功能。
关键词 植物凝集素(BSI-B4) 三叉初级感觉神经元 电镜 光镜 大鼠
生理学研究表明头面部的伤害性信息是由三叉神经中的小神经元传入的，来自这些小神经元的有髓Aδ纤维和无髓C纤维主要终止于三叉神经尾侧亚核的Ⅰ、Ⅱ和Ⅴ层［1］。长期以来，关于初级传入小神经元的标记尚缺乏可靠的方法，最近的研究表明，植物凝集素(Bandeiraea simplicifolia isolectin-B4,BSI-B4)能特异性地标记发出C纤维的小神经元［2，3］，故BSI-B4可以作为初级伤害性信息传导通路的标记物。关于发出无髓C纤维的小神经元的分布及形态学研究多见于脊髓，在三叉初级传入路径中尚少见。本研究用BSI-B4法对三叉初级传入路径中发出C纤维的小神经元的分布及形态特征进行了光镜、电镜观察。
材料和方法
1. 动物准备和组织切片
成年SD大鼠8只，雌雄不拘，体重200～300g。用戊巴比妥钠(40mg/kg体重)腹腔麻醉后，经心灌注生理盐水100ml，再灌固定液500ml，用于光镜观察的固定液为含4%多聚甲醛的0.1mol/L磷缓冲酸液(PB，pH7.2)，用于电镜观察的固定液为含4%多聚甲醛和0.2%戊二醛的0.1mol/L PB。灌流40min后，立即取脑和三叉神经节，分别用上述同种固定液固定4～6h(4℃)，用于光镜观察者再入30%蔗糖的0.1mol/L PB(pH7.4)液中(4℃)至底。将三叉神经节作纵向冰冻切片，延髓三叉神经尾侧亚核段作连续冠状冰冻切片，片厚40μm，用于电镜观察者，将延髓三神经尾侧亚核段作冠状连续振动切片，片厚50μm。
2.组织化学染色
用于光镜观察的切片分2组收集，其中1组进行Nissl染色，用于观察结果定位，参照Paxinos图谱［4］，另1组经0.01mol/L磷酸盐缓冲液(PBS，pH7.4)漂洗后，入BSI-B4-HRP溶液(Sigma,1∶8 000，用含0.3% Triton X-100的PBS稀释)，在室温孵育1h，4℃冰箱过夜，按TMB-ST［5］法进行HRP呈色反应，切片贴于涂有铬明胶的载玻片上经脱水、透明、封片、光镜观察，并随机抽取3套切片，用计算机(Q500软件)对细胞的剖面积进行了分析处理。用于电镜观察的切片顺次入5%、10%、20%(Ⅰ)、20%(Ⅱ)二甲基亚砜0.1mol/L PB(pH7.4)液各10min，切片浸于含20%二甲基亚砜0.1mol/L PB液中用液氮快速冷冻3次，每次10s，切片经PBS漂洗后入BSI-B4-HRP液(用不含Triton X-100的PBS稀释)。在室温孵育4h，4℃冰箱过夜，先按TMB-ST法呈色后，入DAB/Co2+/H2O2溶液加强，切片经PBS洗净后入1%锇酸(0.1 mol/L PB配制)后固定。梯度酒精脱水，Epon 812平板包埋。光镜下切取含BSI-B4标记较多的三叉脊束和三叉神经尾侧亚核浅层粘于聚合后的树脂柱上，超薄切片(厚50μm)，轴、铅双染各5min，日立H-300透射电镜观察，摄片。
3. 对照实验
用PBS代替BSI-B4-HRP,其他步骤相同。
结果
1. 光镜观察结果
在三叉初级传入路径中，BSI-B4标记的神经元为蓝绿色，标记的三叉初级传入路径终末仅见于三叉神经脊束核的尾侧亚核(图1，2，Vc)，在脊间亚核和吻侧亚核均无标记终[1] [2] 下一页
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