|
RCS大鼠视网膜感光细胞的凋亡 |
| |
刘 斌 唐军民** 朱秀安 唐 岩**
(北京医科大学第三临床医学院眼科，**组织学与胚胎学系，北京 100083)
摘 要 为研究遗传性视网膜变性中感光细胞组织结构的时程变化及凋亡，对RCS(Royal College of Surgeons)大鼠及SD大鼠视网膜进行光镜观察和凋亡细胞 TUNEL (TdT-mediated biotin-dUTP nick-end labeling)检测。结果表明，与同龄SD大鼠相比，RCS大鼠视网膜感光细胞从出生后15d开始，出现外节膜盘堆积；20d时，内节排列紊乱、消失；30d时，细胞核固缩，细胞消失；到出生后60 d，仅少许感光细胞保留；100 d时，几乎所有感光细胞消失。TUNEL检测，从出生后25 d开始，RCS大鼠视网膜有TUNEL呈阳性的感光细胞出现，35 d时达高峰。结果提示：RCS大鼠视网膜变性过程中，感光细胞逐渐出现结构异常，并以凋亡的形式死亡，出生后30～40 d是病变的高峰期。
关键词 感光细胞 细胞凋亡 遗传性视网膜变性 RCS大鼠
感光细胞(photoreceptor cell, PRC)变性是视网膜变性的主要病理改变，它是患者视力丧失的主要原因。目前，视网膜变性的发生机制尚不清楚，亦无有效防治方法。因此，研究视网膜PRC变性的发生发展，对人们了解视网膜变性的发生机制，寻找防治视网膜变性的途径具有十分重要的意义。RCS大鼠基因型为 rdy［1］，是研究常染色体隐性遗传性视网膜变性的经典动物模型。我们通过对不同鼠龄的RCS大鼠视网膜形态结构的光镜观察和凋亡细胞的检测，探讨了视网膜PRC变性的机制，为深入研究遗传性视网膜变性的发病机制提供一定的实验依据。
材料和方法
1.动物
RCS大鼠(美国Illinios大学提供)出生后9、15、20、25、30、35、40、60、80、100d各4只，雌雄不拘。12h光照(65～76 lux)/12h黑暗循环条件下饲养。同龄SD大鼠作正常对照。
2.视网膜形态结构的观察及凋亡细胞的检测
35%水合氯醛麻醉动物，摘眼球，去眼前节及玻璃体；4%中性甲醛固定24h，常规石蜡包埋；通过眼杯后极部的5μm厚矢状切片，间隔选3张切片行HE染色，光镜观察。相邻切片进行TUNEL检测［2］：切片常规脱蜡及下行至水；20mg/L的蛋白酶K(Sigma)消化组蛋白15min，以暴露DNA；3%过氧化氢30min以消除内源性过氧化酶。TdT酶(Sigma 公司产品)0.3mg/L，Bio-11-dUTP(B. M. 公司产品)0.01mmol/L反应体系，37℃，2h。TB缓冲液(30mmol/L枸橼酸钠，300mmol/L氯化钠)终止反应；正常血清封闭组织10min；加亲和素-辣根过氧化酶复合物，反应1h；DAB显色，常规封片。阴性对照片不加BIO-11-dUTP，阳性对照片在加酶反应体系前先用DNA酶1(Sigma 公司产品)1mg/L水解DNA。
结 果
1.RCS和SD大鼠PRC的生后发育
正常SD大鼠出生后9d，视网膜各层初具形态，但PRC内、外节很短；15d时，视网膜形态近正常，但PRC外节仍较短，一些细胞核含多个染色质块；20 d、25 d时，视网膜继续发育；到35 d时，视网膜已呈正常形态(图1)。至100d视网膜形态再无明显形态结构变化。与同龄SD大鼠相比，RCS大鼠出生后9 d，视网膜无明显不同；15 d时，外节开始增厚；20 d时，内节开始变窄，部分细胞内节消失，25 d时，少许PRC胞核形态及染色开始出现异常；30 d时，PRC胞核大小不一、开始减少、核固缩、染色加深，外节出现大量膜盘堆积、形态不规则，内节明显变短、排列紊乱、出现空泡；35 d时，浓缩的细胞核增加，有的细胞核染色质位于核边缘，视网膜外层可见少许类巨噬细胞；40 d时，PRC数量明显减少，外核层可见大量细胞核碎块，有较多的类巨噬细胞侵入至视网膜外层，视网膜色素上皮细胞开始出现排列紊乱，体积增大，外形不规则(图2)；60 d时，仅有少许PRC； 100 d时，几乎无PRC保留，剩余的残留物带已很窄，RPE层细胞增殖，排裂紊乱，并有毛细血管穿过，内核层、神经节细胞层基本正常(图3)。
图1 SD大鼠35 d视网膜，视网膜色素上皮层(A)、PRC外节(B)、PRC内节(C)、外核层(D)、内核层(E)及神经节细胞层(F)组织结构均正常。HE [1] [2] 下一页
上一个医学论文： 大鼠表皮角化细胞分裂活性的拓扑学特征
下一个医学论文： 卵丘细胞及胞外基质诱发中国仓鼠精子顶体反应
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 基础医学论文 >> 正文