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大鼠双后肢高能爆炸伤后远位器官的研究 |
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李 巍 蔡文琴 (第三军医大学组织学胚胎学教研室,重庆 400038)
摘 要 为了探讨大鼠双后肢高能爆炸伤后,远位器官(脑、小肠、膀胱)的形态学改变和这些器官中的生长抑素(SOM)和促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)的变化,用原位杂交组织化学、免疫组织化学、常规光、电镜技术和图像分析等方法作为研究手段,结果显示:1. 大鼠双后肢炸伤后,超微结构有明显变化,主要表现为小肠、膀胱中的血管内皮皱缩、胞质内吞饮小泡增多及脑内神经毡水肿和轴突退行性变。2. 炸伤后,远位器官中SOM及SOMmRNA和CRFmRNA均有一过性的、应激性的变化。3.炸伤后,远位器官中不仅神经内分泌细胞SOM和CRF表达增强,而且在小肠和膀胱结缔组织中,也出现了高表达的SOMmRNA和CRFmRNA信号细胞,性质待定。本研究提示:高能爆炸伤可致远位器官损伤,SOM和CRF参与了大鼠炸伤后的创伤应激反应和远达效应的发生,为高能爆炸伤的发生机制和战伤研究提供了基础资料。 关键词 高能爆炸伤 远位器官 生长抑素 促肾上腺皮质激素释放因子 原位杂交 免疫组织化学
随着现代轻武器的发展,出现了许多杀伤力强、速度快、能量传递率高的高速(900m/s以上)破片武器、小型武器等称为高速投射物[1]。这些高速投射物除造成严重的局部损伤外,还会引起远位器官损伤,严重影响伤情转归[2]。因而,高速投射物远达效应,已成为当前火器伤研究的前沿课题。神经内分泌因子在远达效应中的作用,也越来越受到人们的关注,损伤后这些因子的变化,国内外已有少数文献报道[3,4]。但是否会引起神经内分泌因子的前体mRNA的变化,尚未见文献报道。因此,本研究采用免疫组织化学、原位杂交组织化学、常规光、电镜观察和图像分析等技术,研究了大鼠双后肢高能爆炸伤后,远位器官(脑、小肠、膀胱)在常规光、电镜下的形态学变化及其中的生长抑素(SOM)及其mRNA和促肾上腺皮质激素释放因子(corticotropin releasing factor CRF) mRNA的变化,以期为远达效应的发生机制提供基础资料。
材料和方法
健康成年雄性Wistar大鼠100只,随机分成5组,即对照组(16只)、伤后30min、1h、6h、及12h组(致伤组,21只/组)。动物麻醉后,将小型爆炸器(含300mgTNT)捆在大鼠双后肢之间,引爆后,选择双后肢粉碎性断离而腹壁未破者为研究对象(成功率为90%左右)。根据实验方法的不同,以两种方式取材: 1. 光镜、电镜部分 动物麻醉后,直接取膀胱、小肠、脑(以视交叉冠状平面为界向后保留0.5cm),光镜组组织放入Bouin液中固定24h左右。石蜡切片(厚5μm),HE染色,光镜观察。电镜组则将组织修成1mm左右的方块(脑组织取大脑皮层和下丘脑),放入3%戊二醛溶液中4℃固定24h左右。超薄切片(厚50~70nm),铀、铅染色,透射电镜观察。 2. 免疫组织化学和原位杂交组织化学部分 动物麻醉后,用4%多聚甲醛加0.3%饱和苦味酸混合液(pH7.2~7.4)行主动脉灌注,取脑、小肠和膀胱置于相同固定液中8~12h(4℃),再用含20%蔗糖上述固定液浸泡至组织块下沉后冰冻切片(厚30μm)。(1) 免疫组织化学染色:用Sternberger PAP法,显示SOM-imminoreactive(SOM-IR)细胞和纤维。主要染色程序为:冰冻切片经兔SOM抗血清(1∶4 000,Peninsula Lab. USA),4℃过夜;羊抗兔IgG(1∶50,第二军医大学产品),37℃,45min;兔PAP复合物(1∶200,上海第二医科大学产品)37℃,1h;DAB-H2O2液显色。对照实验用0.01 mol/L PBS加1%牛血清白蛋白代替一抗,其余步骤同上。(2) 原位杂交组织化学:用Behringer Mannheim公司的Dig-RNA标记盒,合成反义SOMcRNA探针和CRFcRNA探针。主要程序:冰冻切片经蛋白酶K(2mg/L)37℃孵育20min;分别入含地高辛标记的SOM-cRNA探针和CRF-cRNA探针(0.5 mg/L)的杂交液中杂交,43℃,12~16h;碱性磷酸酶标记的羊抗地高辛抗体Fab段(1∶1 000 Boehringer Mannheim公司),37℃,2h;硝基四氮唑蓝(NBT)和5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸盐(BCIP)混合液在室温下显色3~5h;光镜观察。对照实验用未加探针的杂交液杂交,其余步骤相同。分别将各组、各组织的原位杂交切片[1] [2] 下一页 上一个医学论文: 胚胎及新生期大鼠胃肠道胰岛淀粉样多肽与生长抑素的免疫组织化学定位 下一个医学论文: 小鼠雄性生殖细胞生后发育中的程序性死亡
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